【摘要】：研究目的本課題前期研究明確清膽瀉熱法(代表方為鼻淵舒口服液)通過抑制鼻腔優(yōu)勢菌種表皮葡萄球菌生物膜形成而起效。立足于這一基礎(chǔ),本研究通過RT-PCR技術(shù)檢測成膜相關(guān)基因agrA、luxS、atlE的表達(dá),探討慢性鼻-鼻竇炎細(xì)菌生物膜形成的分子機制。研究方法納入符合標(biāo)準(zhǔn)的膽腑郁熱型慢性鼻-鼻竇炎患者為治療組;納入健康者為對照。對照組不進(jìn)行任何處理,取中鼻道分泌物進(jìn)行指標(biāo)檢測,治療組予以華神集團(tuán)出產(chǎn)的鼻淵舒口服液服用,連續(xù)服用2個療程(14天),在服藥前后分別取同一側(cè)中鼻道鼻腔分泌物。選擇分離優(yōu)勢菌種為表葡菌且治療前鼻腔表皮葡萄球菌生物膜(+),經(jīng)治療后轉(zhuǎn)為鼻腔表皮葡萄球菌生物膜(-)的臨床樣本納入試驗組;其中治療前標(biāo)本8例為試驗組1,治療后標(biāo)本8例為試驗組2,健康人標(biāo)本4例為對照組。設(shè)計并合成引物,運用RT-PCR技術(shù)分別檢測出細(xì)菌生物膜調(diào)控基因:表皮葡萄球菌:agrA、luxS、atlE服藥前后的表達(dá)量,BB170哈氏弧菌發(fā)光法檢測AI-2分子信號強度,最后經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析得出結(jié)論。研究結(jié)果1.所有樣本統(tǒng)計結(jié)果:治療后luxS基因表達(dá)較治療前高(P0.05),但治療前、治療后分別與健康對照組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)(P0.05);agrA基因、atlE基因表達(dá)量治療前與治療后、及治療前后分別與健康對照組比較均無差異(P0.05)。2.luxS/AI-2通路起效部分病例統(tǒng)計結(jié)果:治療后luxS基因表達(dá)較治療前高(P0.05),且治療前低于健康對照組(P0.05),而治療后與健康對照組無差異(P0.05)。agrA基因、atlE基因表達(dá)量治療前與治療后、及治療前后分別與健康對照組比較均無差異(P0.05)。3.agr通路起效部分病例統(tǒng)計結(jié)果:治療后agrA基因表達(dá)較治療前減少(P0.05),且治療前與健康對照組無差異(P0.05),而治療后低于對照組(P0.05)。luxS基因、atlE基因治療前與治療后、治療前后與健康對照組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.相關(guān)性分析結(jié)果:agr通路起效部分病例,不同指標(biāo)差值相關(guān)性檢驗結(jié)果顯示,兩兩指標(biāo)之間均無相關(guān)性。對agrA與atlE行差值線性相關(guān)趨勢分析可觀察到負(fù)相關(guān)趨勢。結(jié)論1.在鼻淵舒口服液治療CRS主要通過抑制優(yōu)勢菌群表葡菌生物膜起效,其膜抑制能力可能通過復(fù)雜的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)起效,這一復(fù)雜系統(tǒng)可能包括QS系統(tǒng)關(guān)鍵基因luxS及相關(guān)生物信號AI-2、agr系統(tǒng)關(guān)鍵基因agrA及相關(guān)粘附調(diào)控基因atlE。2.鼻淵舒口服液對關(guān)鍵基因luxS的調(diào)節(jié)表現(xiàn)為上調(diào),通過上調(diào)luxS基因降低了AI-2信號,負(fù)調(diào)控達(dá)到成膜抑制效果;對關(guān)鍵基因agrA的調(diào)節(jié)表現(xiàn)為下調(diào),正調(diào)控達(dá)到成膜抑制效果。3.對agr相關(guān)粘附基因atlE的調(diào)節(jié)表現(xiàn)較復(fù)雜,既有上調(diào)也有下調(diào),表明鼻淵舒口服液并非通過agr-atlE通路的單一線性調(diào)節(jié)影響表葡菌BF形成,而是可能直接調(diào)節(jié)atlE的表達(dá),或者存在其他復(fù)雜通路同時影響atlE的表達(dá)。
【圖文】：

電鏡掃描下形成過程中的葡萄球菌生物膜

引圖 2：細(xì)菌生物膜的形成與發(fā)展，引自 tliassa, Barnes and Albesa. Biochemical and biophysicalresearch communications.[20]在細(xì)菌的粘附之前，條件膜的形成往往率先出現(xiàn)，在人體而言，即是各種體液及其所含糖蛋白、金屬離子、粘多糖及其他要素構(gòu)成的，，吸附于細(xì)菌定植
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R276.1

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本文編號：2610388