【摘要】：目的構建真核重組質粒N2ICD/p CMV-Tag4并轉染HEK 293T細胞進行表達。方法根據(jù)GenBank上Notch2的NICD序列設計引物,采用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)的方法從人宮頸癌細胞Hela細胞擴增人Notch2受體胞內區(qū)基因(N2ICD),酶切和測序鑒定后克隆至攜帶FLAG標簽的真核表達載體pCMV-Tag4并進行瞬時和穩(wěn)定轉染HEK 293T細胞,熒光定量PCR(Q-PCR)和蛋白印跡(WB)檢測目的蛋白的表達。結果通過RT-PCR克隆獲得人N2ICD基因并成功構建重組質粒N2ICD/pCMV-Tag4,目的蛋白N2ICD在HEK 293T細胞中獲得表達。結論成功構建穩(wěn)定表達N2ICD的HEK 293T細胞株,為進一步探討Notch2受體的功能奠定基礎。

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉海濤;陳余清;;Notch信號通路在肺癌中的作用[J];蚌埠醫(yī)學院學報;2013年01期

2 Xiao Du;Zhong Cheng;Yi-Han Wang;Zi-Heng Guo;Si-Qin Zhang;Jian-Kun Hu;Zong-Guang Zhou;;Role of Notch signaling pathway in gastric cancer: A meta-analysis of the literature[J];World Journal of Gastroenterology;2014年27期

3 俞海;葛盛芳;盧健;錢關祥;;過表達Notch1對腫瘤細胞增殖的影響[J];上海交通大學學報(醫(yī)學版);2007年03期

4 谷峰;馬勇杰;付麗;;Notch家族蛋白在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的作用及分子機制[J];中華病理學雜志;2007年09期

5 裘明哲;浦佩玉;;Notch信號通路異常和腫瘤的生成[J];透析與人工器官;2008年02期

6 史紅飛;李燁佳;姚軍;;Notch1信號通路與腫瘤的發(fā)生發(fā)展[J];檢驗醫(yī)學與臨床;2010年11期

7 李林;羅進勇;;Notch信號通路及其與腫瘤的關系[J];臨床和實驗醫(yī)學雜志;2010年19期

8 孫剛;田懷杲;;Notch信號通路在腫瘤中的研究進展[J];蚌埠醫(yī)學院學報;2010年10期

9 王冠玲;胡群;劉雙又;張耀東;張小玲;劉愛國;張柳清;;急性白血病患兒Notch1蛋白表達及其臨床意義研究[J];中國實用兒科雜志;2010年10期

10 ;Late SV40 factor:A key mediator of Notch signaling in human hepatocarcinogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2011年29期

相關會議論文 前10條

1 張麗;梁英民;夏德雨;李國輝;蔣姍姍;谷芳娜;;Notch信號在急性早幼粒細胞白血病患者骨髓中的表達研究[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

2 ;Expression profile of Notch-related genes in multi-drug resistant K562/A02 cells compared with parental K562 cells[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

3 黃佳圓;王銳;陳龍邦;;Expression of Notch-1 and Its Clinical Significance in Different Histological Subtypes of Human Lung Adenocarcinoma[A];2013華東胸部腫瘤論壇暨第六屆浙江省胸部腫瘤論壇論文集[C];2013年

4 Li Li;Yi-yao Liu;;Notch-1 pathway activation facilitates human breast cancer cell adhesion,migration and invasion[A];第十屆全國生物力學學術會議暨第十二屆全國生物流變學學術會議論文摘要匯編[C];2012年

5 齊艷霞;;Notch1 siRNA抑制小鼠惡性黑色素瘤細胞增殖的體內外研究[A];中國腫瘤內科進展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

6 ;The Expression of Notch-1 and Jagged-1 in Human Papillary Bladder Cancer and Its Association with Shorter Survival[A];第十五屆全國泌尿外科學術會議論文集[C];2008年

7 黃佳圓;宋海珠;劉標;余波;王銳;陳龍邦;;Notch-1在人肺腺癌不同組織學類型中的表達及其臨床意義[A];中國腫瘤內科進展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

8 張可杰;鹿全意;張鵬;牛小青;王昭;趙江寧;李蒲;胡嘉升;;Notch1通路活化抑制EC109細胞的增殖及機制探討[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

9 范任華;陳平圣;;肝癌細胞中激活的Notch信號通路對核轉錄因子NF-κB表達的影響[A];2010’全國腫瘤分子標志及應用學術研討會暨第五屆中國中青年腫瘤專家論壇論文匯編[C];2010年

10 ;Regulation of Notch target gene Hesl expression by TGF-α in human glioma cell line U251[A];Proceedings of the 7th Biennial Meeting and the 5th Congress of the Chinese Society for Neuroscience[C];2007年

相關碩士學位論文 前10條

1 洪秀理;Notch信號抑制劑抑制骨髓瘤細胞增殖的機理研究[D];福建醫(yī)科大學;2011年

2 楊春桃;Notch基因家庭在涎腺腫瘤中的表達及意義[D];福建醫(yī)科大學;2008年

3 李斌;Notch 1在人腦膠質細胞瘤中的表達及其胞內段真核表達載體的構建[D];第四軍醫(yī)大學;2008年

4 王明義;Notch1信號蛋白在卵巢腫瘤發(fā)生中的作用及其機制的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學;2008年

5 張勇;Notch1在肝癌組織中的表達及其對肝癌細胞侵襲能力的影響[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

6 李榆;Notch受體在胃癌中的表達及臨床意義[D];蘭州大學;2012年

7 王冠玲;Notch1蛋白在兒童急性白血病中的表達及意義[D];華中科技大學;2010年

8 衛(wèi)歡;Notch在急性T淋巴細胞白血病和胰腺導管癌中的功能和機制研究[D];華中科技大學;2012年

9 尹鄲丹;Notch1對慢性粒細胞白血病細胞系K562的影響[D];第四軍醫(yī)大學;2007年

10 弭麗麗;Notch1-4及Jagged1在肝細胞肝癌組織的表達[D];河北醫(yī)科大學;2010年

，

本文編號：2586967