發(fā)布時間：2020-02-21 06:02

【摘要】：眾所周知,利用同源重組原理,對DNA雙鏈斷裂(double-strand breaks,DSBs)引起的基因損傷進行修復是早期研究人員用于制造基因突變小鼠的方法之一(Capecchi,1989)。但由于其效率低以及消耗時間過長而被鋅指核糖核酸酶(ZFNs)和轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應物核酸酶(TALENs)所取代(Bibikova et al.,2002;Moscou and Bogdanove,2009)。然而,ZFNs和TALENs也并非最優(yōu)基因修飾技術,兩者因其步驟復雜和細胞毒性,運用受到限制。近年來,已逐步被一種新基因編輯技術CRISPR/Cas9所代替。CRISPR/Cas9最初起源于細菌的自我防御系統(tǒng),是近年運用于細胞和動物模型基因改造的主要方法,可以快速而高效獲得基因敲除模型。泛素化系統(tǒng)是機體維持正常生物功能的蛋白降解系統(tǒng),也是近年的研究熱點,睪丸特異表達基因Rnf148是泛素化連接酶家族成員之一。為此,我們運用cas9技術構(gòu)建小鼠Rnf148基因敲除模型,以進一步研究其在小鼠生精過程中的作用。通過針對Rnf148基因外顯子設計特異的sg RNA(short guide RNA),與Cas9 m RNA共顯微注射小鼠受精卵,我們成功獲得了Rnf148的F0代敲除小鼠,將其與野生型小鼠交配,進一步成功獲得了純合Rnf148基因敲除小鼠。因此,利用cas9技術確實可以獲得基因敲除鼠用于后續(xù)研究。

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

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【共引文獻】

相關期刊論文 前1條

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【相似文獻】

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