【摘要】：以日本結縷草(Zoysia japonica)‘Meyer’品種為材料,克隆獲得了1個DREB(dehydration responsive element binding)類轉錄因子基因,命名為Zj DREB4.1。該基因編碼區(qū)長651 bp,編碼216個氨基酸,推測的蛋白質Zj DREB4.1分子量為22.9 k D,等電點p I為5.74,第50-110位氨基酸組成一個典型的AP2保守結構域。在基因的系統(tǒng)發(fā)生樹中,Zj DREB4.1蛋白與擬南芥At TINY蛋白和玉米Zm DBF2蛋白聚為一支,屬于DREB亞家族A-4組。在葉組織中Zj DREB4.1為組成型表達,受低溫誘導上調表達,在干旱和高鹽脅迫下表達先下調后恢復至正常水平。
【圖文】：

嶁蛄薪鈉卸嘈蛄斜榷院凸菇?基因系統(tǒng)發(fā)生樹，，結果（圖5）顯示ZjDREB4.1屬于DREB亞家族的A-4亞組，與水稻的OsDREB4.4遺傳距離最近。進化樹中A-4亞組的10個同源基因明顯地分為3個分支，水稻的4個基因分別歸屬到3個分支中。在第一個分支中含有單、雙子葉植物的同源基因，但兩類明顯地分開；ZjDREB4.1與水稻的OsDREB4.1/4.4、玉米的ZmDBF2和小麥的TmCBF7同屬第二分支；而水稻OsDREB4.2為一個單獨的分支。說明植物DREB類轉錄因子A-4亞組M121000750500bp2000M：標準分子量；1：模板為cDNA；2：模板為基因組DNA圖1ZjDREB4.1基因擴增結果2.2ZjDREB4.1基因序列分析ZjDREB4.1基因CDS長651bp，編碼一條由216個氨基酸殘基組成的多肽（圖2）。推測的平均蛋白質分子量為22.9kD，理論pI為5.74。蛋白的分子式組成為C996H1556N290O319S7，其中丙氨酸（Ala）含量最高，為15.7%，其次為絲氨酸（Ser，12.0%）、脯氨酸（Pro，10.2%）和天冬酰胺（Asp，7.9%），酪氨酸（Tyr）含量最低，為0.9%。利用ExPASy分析該蛋白在酵母和大腸桿菌中的半衰期分別大于20和10h，不穩(wěn)定系數(shù)為47.80（40以上為穩(wěn)定蛋白），推測為穩(wěn)定蛋白。在NCBI網(wǎng)站上對ZjDREB4.1蛋白進行保守結構域預測結果表明，在50-110位氨基酸之間含有一個典型的AP2結構域（conservedAP2domain）。cNLSMapper分析顯示，蛋白ZjDREB4.1有兩個核定位信號，分別位于第32-40和第66-80位氨

生物技術通報BiotechnologyBulletin842017,Vol.33,No.2一些成員的出現(xiàn)可能在單、雙子葉植物分化之前。2.4ZjDREB4.1基因表達模式分析以actin1為內參，采用半定量RT-PCR技術比較ZjDREB4.1在低溫、干旱和高鹽脅迫下的表達量變化。結果（圖6）表明，ZjDREB4.1在正常條件下有表達；在低溫脅迫2-72h時間內上調表達，其中在2h和72h表達水平較高；在干旱和高鹽脅迫下，2-24h時間內均下調表達，72h后恢復至接近正常水平，說明ZjDREB4.1是結縷草葉組織的正常表達基因，受低溫脅迫誘導上調表達，在干旱和高鹽脅虛線框為潛在的磷酸化位點；N端潛在的堿性核定位信號用方框標出；陰影部分表示AP2/EREBP保守結構域；*表示終止密碼子圖2ZjDREB4.1基因的核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列ABA：二級結構分析（線）段由長及短分別代表Helix，Sheet，Turn，coil；B：保守結構域模型圖3ZjDREB4.1蛋白二級結構和模型預測


本文編號：2575423