【摘要】：馬鈴薯Y病毒(PVY)是危害煙葉生產的主要病害之一。已有研究表明,煙草對PVY的抗性由隱性抗性基因e IF4E-6控制。本研究利用CRISPR-Cas9技術定向敲除煙草e IF4E-6基因以改良優(yōu)質烤煙品種K326的PVY抗性。我們構建了2個特異靶向e IF4E-6基因的CRISPR-Cas9載體g1和g2。構建的載體轉化煙草品種K326,PCR檢測潮霉素B抗性標簽鑒定陽性T0代轉基因煙草。PCR擴增陽性轉基因煙株靶位點周圍DNA序列,對PCR產物進行直接測序或克隆測序,篩選自靶位點處發(fā)生突變的煙株,得到2個載體各約50株陽性轉化T0代煙株。序列分析結果表明,有2株g1載體轉化的煙株在靶位點處出現雜合型單堿基缺失,分別有3和4株g1和g2載體轉化的煙株在靶位點處出現雜合型1~2個堿基的替換。這些目的基因雜合型突變的T0代煙株為后續(xù)自交獲得目的基因純合敲除后代材料并最終獲得PVY抗性改良的煙草提供了研究基礎。

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1 ;基因工程[J];生物技術通報;1988年02期

2 ;[J];;年期

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本文編號：2573662