發(fā)布時間：2020-01-20 12:22

【摘要】：花色苷(Anthocyanins),不僅能夠提高植株適應(yīng)和抵御逆境的能力,而且具有明顯的保健功能,是決定紅葡萄酒品質(zhì)和感官質(zhì)量的重要因素之一。植物體內(nèi)UFGT是合成花色苷的最后一個關(guān)鍵酶,直接影響花色苷的含量。本試驗以赤霞珠(Vitis vinifera L.cv Cabernet Sauvignon)葡萄為試材,在獲得ufgt基因全長的基礎(chǔ)上,制備多克隆抗體；定期對葡萄植株進行UV-C照射,在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上研究UV-C照射對ufgt表達和花色苷積累的影響,主要結(jié)果如下：擴增葡萄果實ufgt基因全長1371 bp,并構(gòu)建克隆載體。將克隆載體與表達載體pET-30a進行雙酶切,重組得到表達載體pET-ufgt。優(yōu)化蛋白表達條件,使UFGT蛋白高效表達并純化,以此為抗原,免疫新西蘭白兔,制備UFGT多克隆抗體。以赤霞珠葡萄果實為試材,研究對照和UV-C照射10 min后UFGT對花色苷含量變化規(guī)律的影響。采用熒光定量技術(shù)分析ufgt基因表達規(guī)律,結(jié)果表明UV-C照射10 min并未明顯誘導ufgt基因的表達,其表達規(guī)律與對照大致相同；采用Western-blotting技術(shù),分析UFGT蛋白含量變化規(guī)律,結(jié)果表明UV-C處理10 min沒有改變UFGT蛋白的變化規(guī)律,但明顯誘導了UFGT蛋白的積累；采用高效液相色譜技術(shù)和分光光度計法分別分析UFGT酶活性和花色苷含量的變化規(guī)律,結(jié)果表明UV-C照射10min后UFGT酶活性和花色苷含量均都高于對照；分析可知對照和UV-C照射10 min后花色苷含量與ufgt基因表達、蛋白含量及酶活性均呈顯著正相關(guān)。由UFGT生物信息學分析可得,UFGT蛋白由456個氨基酸殘基組成,分子量大小約為50 kDa,可能包含信號肽與蛋白跨膜結(jié)構(gòu),其二級結(jié)構(gòu)由35.53% α-螺旋、16.67%延伸鏈和47.81%無規(guī)則卷曲組成。分析親緣性可知,赤霞殊葡萄UFGT蛋白與山葡萄的同源性最高.與草莓同源性次之,與玉米的同源性較低。
【圖文】：

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■逡逑Ｈ逡逑圖７葡萄果實總ＲＮＡ電泳圖逡逑Ｆｉｇ．７邋Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ邋ｏｆ邋ｔｏｔａｌ邋ＲＮＡ邋ｆｒｏｍ邋ｇｒａｐｅ邋ｂｅｒｒｉｅｓ逡逑３．２邋居ｆ基因的民Ｔ－ＰＣ民擴增逡逑用Ｔａｋａｒａ公司的反轉(zhuǎn)錄試劑盒將葡萄果實總民ＮＡ反轉(zhuǎn)錄成ｃＤＮＡ，再板進行ＰＣＲ擴增，，瓊脂糖凝膠檢測得到長度約為１５００邋ｂｐ的基因片段，與已／ｇｆ編碼框基因大致相符。逡逑１邐Ｍ逡逑
【學位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S663.1

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本文編號：2571270