【摘要】：目的:探討靶向沉默HOXB7基因?qū)θ宋赴㏒GC-7901細(xì)胞活力、遷移和侵襲作用的影響及潛在機(jī)制。方法:設(shè)計(jì)靶向HOXB7的siRNA,然后瞬時(shí)轉(zhuǎn)染胃癌SGC-7901細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot法檢測siRNA靶向沉默的效果。MTT法檢測細(xì)胞的活力,Western blot法檢測細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CDK4和cyclin D1蛋白的表達(dá)水平,Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測SGC-7901細(xì)胞的侵襲能力,實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot法檢測胃癌SGC-7901細(xì)胞PTEN和VEGF的表達(dá)水平以及p-AKT的蛋白水平。結(jié)果:胃癌組織中HOXB7基因在mRNA和蛋白水平的表達(dá)均顯著高于對照組織。siRNA可有效靶向沉默SGC-7901細(xì)胞中HOXB7的表達(dá),且沉默HOXB7表達(dá)后SGC-7901細(xì)胞活力明顯下降,同時(shí)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CDK4和cyclin D1的表達(dá)亦下調(diào)。靶向沉默HOXB7可明顯抑制SGC-7901細(xì)胞中AKT的磷酸化水平,抑制胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移,同時(shí)下調(diào)VEGF的表達(dá)水平,抑制胃癌組織中的腫瘤血管生成。結(jié)論:HOXB7作為一個(gè)癌基因,可上調(diào)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CDK4、cyclin D1和侵襲相關(guān)分子VEGF的表達(dá),上調(diào)AKT的磷酸化水平,進(jìn)而抑制PTEN的功能,促進(jìn)胃癌細(xì)胞SGC-7901的生長、遷移和侵襲能力。
【圖文】：

3HOXB7基因靶向沉默對SGC-7901細(xì)胞活力的影響如圖3所示，HOXB7基因沉默組24h、48h和72h后細(xì)胞活力明顯低于未轉(zhuǎn)染的空白對照組和轉(zhuǎn)染siＲNAcontrol的陰性對照組，，說明HOXB7基因靶向沉默可以抑制SGC-7901細(xì)胞的存活率。4HOXB7基因靶向沉默對SGC-7901細(xì)胞中周期相關(guān)蛋白CDK4和cyclinD1表達(dá)的影響圖4所示，HOXB7基因沉默組CDK4和cyclinD1的mＲNA水平均明顯低于空白對照組和siＲNAcontrol陰性對照組。同時(shí)HOXB7基因沉默組CDK4和cyclinD1的蛋白表達(dá)強(qiáng)度均較其他2組明顯降低，灰度計(jì)算結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P＜0.05)，表明HOXB7基因靶向沉默后SGC-7901細(xì)胞活力的下降可能與周期相關(guān)蛋白CDK4和cyclinD1表達(dá)下調(diào)有關(guān)，見圖4。Figure3．TheeffectofHOXB7ontheviabilityoftheSGC-7901cells．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vssh-HOXB7group．圖3SGC-7901細(xì)胞中的HOXB7對細(xì)胞存活率的影響Figure4．TheeffectofHOXB7ontheexpressionofcellcycle-relatedproteins．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vssh-HOXB7group．圖4SGC-7901細(xì)胞中HOXB7對細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的影響5HOXB7基因靶向沉默對SGC-7901細(xì)胞侵襲能力的影響通過Transwell實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞的侵襲能力，與未轉(zhuǎn)染空白對照組和轉(zhuǎn)染siＲNAcontrol的陰性對照組比較，轉(zhuǎn)染HOXB7siＲNA的基因沉默組中染色陽性的細(xì)胞數(shù)量即穿膜細(xì)胞數(shù)量減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P＜0．05)，見圖5。Figure5．TheeffectofHOXB7oncellinvasionability(×200)．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vssh-HOXB7group．圖5SGC-7901細(xì)胞中HOXB7對細(xì)胞侵襲能力的影響·1827·

3HOXB7基因靶向沉默對SGC-7901細(xì)胞活力的影響如圖3所示，HOXB7基因沉默組24h、48h和72h后細(xì)胞活力明顯低于未轉(zhuǎn)染的空白對照組和轉(zhuǎn)染siＲNAcontrol的陰性對照組，說明HOXB7基因靶向沉默可以抑制SGC-7901細(xì)胞的存活率。4HOXB7基因靶向沉默對SGC-7901細(xì)胞中周期相關(guān)蛋白CDK4和cyclinD1表達(dá)的影響圖4所示，HOXB7基因沉默組CDK4和cyclinD1的mＲNA水平均明顯低于空白對照組和siＲNAcontrol陰性對照組。同時(shí)HOXB7基因沉默組CDK4和cyclinD1的蛋白表達(dá)強(qiáng)度均較其他2組明顯降低，灰度計(jì)算結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P＜0.05)，表明HOXB7基因靶向沉默后SGC-7901細(xì)胞活力的下降可能與周期相關(guān)蛋白CDK4和cyclinD1表達(dá)下調(diào)有關(guān)，見圖4。Figure3．TheeffectofHOXB7ontheviabilityoftheSGC-7901cells．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vssh-HOXB7group．圖3SGC-7901細(xì)胞中的HOXB7對細(xì)胞存活率的影響Figure4．TheeffectofHOXB7ontheexpressionofcellcycle-relatedproteins．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vssh-HOXB7group．圖4SGC-7901細(xì)胞中HOXB7對細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的影響5HOXB7基因靶向沉默對SGC-7901細(xì)胞侵襲能力的影響通過Transwell實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞的侵襲能力，與未轉(zhuǎn)染空白對照組和轉(zhuǎn)染siＲNAcontrol的陰性對照組比較，轉(zhuǎn)染HOXB7siＲNA的基因沉默組中染色陽性的細(xì)胞數(shù)量即穿膜細(xì)胞數(shù)量減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P＜0．05)，見圖5。Figure5．TheeffectofHOXB7oncellinvasionability(×200)．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vssh-HOXB7group．圖5SGC-7901細(xì)胞中HOXB7對細(xì)胞侵襲能力的影響·1827·

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1 朱發(fā)霞;李明梅;湯夢婕;向清明;林從堯;;同源異型盒基因HOXB7在乳腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J];微循環(huán)學(xué)雜志;2012年04期

2 ;[J];;年期

本文編號：2565478