發(fā)布時間：2019-11-04 18:07

【摘要】：研究目的本實驗研究白細胞介素35(Interleukin 35,IL-35)基因修飾的間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)對同種異體小鼠心臟移植排斥反應的影響及其作用機制,探索出有效減輕移植術后排斥反應、誘導免疫耐受的新途徑。研究方法1、利用Ⅰ型膠原酶消化法獲取小鼠脂肪來源的間充質(zhì)干細胞(adipose tissue-derived MSCs,ad-MSCs),應用流式細胞術(FCM)進行表型鑒定。2、體外以過表達IL-35慢病毒顆粒感染小鼠脂肪間充質(zhì)干細胞,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測細胞上清中IL-35表達情況,成功獲得IL-35基因修飾的MSCs(IL-35-MSCs)。3、建立小鼠異位腹腔心臟移植模型,設置IL-35-MSCs實驗組、MSCs處理組、生理鹽水對照組、同系對照組。觀察各組移植心臟存活時間,評估術后5天移植物急性排斥反應病理分級;蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)法檢測移植心臟IL-17表達水平;ELISA法檢測術后5天各組外周血IL-35濃度;采用流式細胞術檢測術后5天各組小鼠體內(nèi)T細胞亞群變化。研究結果1、小鼠脂肪來源的間充質(zhì)干細胞成功獲取,過表達IL-35慢病毒載體成功感染間充質(zhì)干細胞,感染后細胞上清IL-35濃度達到265.8±16.650 pg/ml。2、成功構建小鼠異位腹腔心臟移植模型,與異系生理鹽水對照組(6.17±0.753d)相比較:MSCs處理組(10.67±1.211d)及IL-35-MSCs實驗組(14.5±1.049d)移植心臟平均存活時間明顯延長(P0.01);術后5天移植物急性排斥反應病理分級較對照組明顯降低(P0.01)。3、ELISA法結果顯示IL-35-MSCs實驗組小鼠體內(nèi)IL-35穩(wěn)定表達,濃度達60.71±5.38 pg/ml。4、與對照組相比,MSCs處理組及IL-35-MSCs實驗組術后5天外周血和脾臟Th1/Th2、Th17比例均明顯降低(P0.01),脾臟CD4+CD25+T細胞比例明顯增高(P0.01)。5、Western Blot檢測結果顯示MSCs處理組及IL-35-MSCs實驗組移植物IL-17蛋白表達水平較生理鹽水對照組明顯降低。研究結論1、過表達IL-35的慢病毒能夠成功、高效率感染小鼠來源的ad-MSCs;在體內(nèi)外實驗中,IL-35-MSCs均能夠持續(xù)、有效表達IL-35。2、小鼠異位腹腔心臟移植模型是研究器官移植排斥反應的理想動物模型。IL-35-MSCs對同種異系小鼠心臟移植有抗排斥作用,其機制可能為IL-35及MSCs產(chǎn)生免疫調(diào)控協(xié)同作用,刺激CD4+CD25+Treg的生成,誘導小鼠體內(nèi)Th1/Th2平衡偏移、降低Th17細胞比例,延長心臟存活時間。IL-35-MSCs細胞免疫療法可能成為有效誘導移植免疫耐受的新途徑。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R654.2

【參考文獻】

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本文編號：2555772