【摘要】：棗樹是我國重要的經(jīng)濟(jì)樹種之一,具有抗旱、耐瘠薄、適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn),并且棗樹果實(shí)營養(yǎng)豐富,深受大眾喜愛。棗樹雜交育種由于工作量大、育種周期長,極大地限制了棗樹的栽培發(fā)展,與此同時,棗尺蠖、棗粘蟲、棗桃小食心蟲、黃刺蛾等常見害蟲也極大地制約了棗樹的生產(chǎn)栽培。棗樹蟲害研究的需求,隨著棗樹種植面積的一步步擴(kuò)大,棗樹蟲害一步步地蔓延和加重,也在慢慢地擴(kuò)大和延伸�，F(xiàn)代分子生物技術(shù),尤其是植物組織培養(yǎng)和基因工程的發(fā)展,為棗樹定向改良和新品種選育提供了重要的技術(shù)支持;而轉(zhuǎn)基因技術(shù)的出現(xiàn)為快速培育棗樹抗蟲新種質(zhì)提供了可能。本試驗(yàn)以‘蜂蜜罐’棗胚培苗上胚軸和子葉為試驗(yàn)材料,進(jìn)行根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化,通過比較不同處理的GUS瞬時表達(dá)率,研究了不同的預(yù)培養(yǎng)時間、菌液濃度、侵染時間、共培養(yǎng)時間、乙酰丁香酮濃度和侵染方式對轉(zhuǎn)化效率的影響,優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)上胚軸和子葉的遺傳轉(zhuǎn)化體系;在此基礎(chǔ)上,以‘蜂蜜罐’棗上胚軸、子葉和葉片為外植體,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行Bt基因的轉(zhuǎn)化研究,為遺傳轉(zhuǎn)化培育抗蟲新種質(zhì)奠定了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.不同外植體Kan敏感性試驗(yàn)以上胚軸和子葉為外植體,探究了不同濃度Kan對愈傷組織形成和不定芽再生的影響。結(jié)果表明,50 mg/L Kan為抑制上胚軸和子葉再生的最適濃度。2.上胚軸和子葉遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立通過比較GUS瞬時表達(dá)率,確定了預(yù)培養(yǎng)時間、菌液濃度、侵染時間、共培養(yǎng)時間、乙酰丁香酮濃度和侵染方式的最適處理。結(jié)果表明,以上胚軸為外植體時,菌液濃度OD600為0.5,采用真空輔助侵染10 min,共培養(yǎng)培養(yǎng)基添加20 mg/L乙酰丁香酮,共培養(yǎng)3 d后GUS瞬時表達(dá)率最高,為最佳轉(zhuǎn)化體系;以子葉為外植體,預(yù)培養(yǎng)3 d,菌液濃度OD600為0.5,采用真空輔助侵染10 min,共培養(yǎng)培養(yǎng)基添加10 mg/L乙酰丁香酮,共培養(yǎng)3 d后GUS瞬時表達(dá)率最高,為最佳遺傳轉(zhuǎn)化體系。3.農(nóng)桿菌介導(dǎo)‘蜂蜜罐’棗不同外植體Bt基因的轉(zhuǎn)化分別以上胚軸、子葉和葉片為外植體,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)Bt基因遺傳轉(zhuǎn)化,對三種外植體獲得的抗性芽進(jìn)行PCR檢測,共獲得21株經(jīng)PCR檢測為陽性的植株,并對三種外植體的轉(zhuǎn)化率進(jìn)行了比較。
【圖文】：

不同濃度 Kan 的上胚軸再生狀況如圖 3 所示。在添加 75 mg/L 和 100 mg/L Kan 的處理中，上胚軸切口無愈傷產(chǎn)生，并且部分外植體都已褐化（圖 D、圖 E）；而在添加 0 mg/L 和圖 3 上胚軸不同濃度 Kan 的再生A：0 mg/L；B：25 mg/L；C：50 mg/L；D：75 mg/L；E：100 mg/L.Figure 3:Regeneration of epicotyls under different concentration of KanA: 0 mg/L; B: 25 mg/L; C: 50 mg/L; D: 75 mg/L; E: 100 mg/L.A B C D E

不同濃度 Kan 的子葉再生狀況如圖 4 所示。僅當(dāng)添加 25 mg/L Kan 時，少部分子葉切口處有少量愈傷組織產(chǎn)生，，當(dāng)添加的 Kan 濃度大于 25 mg/L 時，所有子葉均無愈傷組織形成，并且子葉切口褐化；當(dāng)不添加 Kan 時，所有子葉均有愈傷組織形成，同時部分子葉切口再生不定芽。綜合愈傷組織形成率和外植體再生狀況確定子葉篩選培養(yǎng)基中添加的 Kan 濃度為 50 mg/L。
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S665.1

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本文編號：2553735