【摘要】：目的：通過觀察雷公藤紅素對AS患者外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)活性的影響,檢測不同濃度雷公藤紅素作用下HLA-B27及其啟動子相關(guān)激活因子TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6表達(dá)的變化,為雷公藤治療AS的分子機制提供新的依據(jù)。方法：1、為了研究雷公藤紅素對AS患者PBMC的細(xì)胞毒作用,本實驗采用3例確診AS患者外周血,提取PBMC進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),24小時后加入不同濃度雷公藤紅素,共同培養(yǎng)48小時后進(jìn)行Cell Counting Kit-8 (CCK-8)檢測,以評估雷公藤紅素對PBMC細(xì)胞活性的影響。2、為了證明雷公藤紅素對AS患者PBMC中HLA-B27基因啟動子可能存在抑制作用,本實驗采用10例確診AS患者10ml外周血提取PBMC,24小時后加入不同濃度雷公藤紅素，共同培養(yǎng)48小時后提取RNA。采用Real-time PCR的方法檢測細(xì)胞中HLA-B27和TNF-α, IFN-γ, IL-1β及IL-6 mRNA表達(dá)變化。同時收集上清液,采用ELISA的方法檢測HLA-B27和TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6細(xì)胞因子水平變化。結(jié)果：1、發(fā)現(xiàn)雷公藤紅素濃度低于1.0μmol/L時,對AS患者PBMC細(xì)胞活性無明顯抑制作用(p0.05);當(dāng)濃度高于3.0μmol/L時,雷公藤紅素對PBMC細(xì)胞活性呈明顯抑制作用(p0.05)2、發(fā)現(xiàn)AS患者PBMC加藥組與對照組相比,HLA-B27和TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6 mRNA量隨雷公藤紅素濃度增高而呈降低趨勢,特別是當(dāng)雷公藤紅素濃度為1.0μmol/L時,抑制作用最強,其中HLA-B27和TNF-α, IL-1β, IL-6 mRNA表達(dá)量的變化具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);AS患者PBMC加藥組與對照組相比HLA-B27和TNF-aIFN-γ, IL-1β, IL-6細(xì)胞因子水平呈降低趨勢,同樣當(dāng)雷公藤紅素濃度為1.Oμmol/L時,抑制作用最強,其中TNF-α, IL-1β, IL-6水平的變化具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論：1、雷公藤紅素在高濃度時對AS患者PBMC細(xì)胞活力有抑制作用,但在一定濃度范圍內(nèi)對PBMC細(xì)胞活力無明顯影響,說明在一定濃度范圍內(nèi)雷公藤紅素?zé)o明顯細(xì)胞毒性。2、雷公藤紅素作用下HLA-B27和TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6表達(dá)均降低,提示雷公藤紅素可能通過抑制TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6等因子來影響HLA-B27基因啟動子活性,從而降低HLA-B27的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R285

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本文編號：2529669