【摘要】：目的1.觀察腫瘤相關(guān)鈣信號(hào)傳導(dǎo)蛋白-2(TROP-2)與上皮間質(zhì)表型轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)蛋白(E-鈣黏蛋白,波形蛋白)及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)蛋白在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)情況,并探討它們之間的相關(guān)性及臨床意義;2.研究TROP-2基因過(guò)表達(dá)對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、EMT的影響;3.探討TROP-2調(diào)控EMT的分子機(jī)制。方法1.收集行手術(shù)切除且隨訪滿(mǎn)5年的結(jié)直腸癌患者組織標(biāo)本80例。全部病例術(shù)前均未行化療、放療及靶向治療。應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)標(biāo)本中TROP-2與EMT相關(guān)蛋白及MMP-9蛋白的表達(dá)情況,分析它們與各臨床病理參數(shù)間的關(guān)系,探討TROP-2與EMT相關(guān)蛋白及MMP-9蛋白的相關(guān)性。2.將TROP-2慢病毒載體轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞,分別以未處理組為空白對(duì)照組(Con-A),以不包含TROP-2的為空載對(duì)照組(Con-B)。收集各組細(xì)胞,分別采用定量PCR和Western Blot方法檢測(cè)TROP-2、E-鈣黏蛋白、波形蛋白和MMP-9的基因和蛋白;采用顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;采用平板克隆方法檢測(cè)癌細(xì)胞增殖情況,分別采用劃痕修復(fù)試驗(yàn)和Transwell方法檢測(cè)癌細(xì)胞遷移和侵襲力情況。3.為進(jìn)一步探討TROP-2分子機(jī)制,采用核因子κB(NF-κB)抑制劑吡咯烷銨(PDTC)處理TROP-2過(guò)表達(dá)細(xì)胞株,以未用PDTC處理的慢病毒TROP-2組作為對(duì)照,分別采用定量PCR和Western Blot方法檢測(cè)癌細(xì)胞E-鈣黏蛋白、波形蛋白和MMP-9基因和蛋白水平。結(jié)果1.TROP-2,E-鈣黏蛋白,波形蛋白和MMP-9蛋白在結(jié)直腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為81.25%,16.25%,48.75%和72.5%。結(jié)直腸癌組織中,TROP-2表達(dá)與腫瘤的TNM分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及5年生存率相關(guān)(P0.05);E-鈣黏蛋白表達(dá)與腫瘤部位、浸潤(rùn)深度及5年生存率相關(guān)(P0.05);波形蛋白表達(dá)與腫瘤的TNM分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及5年生存率相關(guān)(P0.05);MMP-9表達(dá)與腫瘤的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及5年生存率相關(guān)(P0.05)。結(jié)直腸癌組織中,TROP-2與波形蛋白及MMP-9在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.276,P0.05;r=0.421,P0.05),TROP-2與E-鈣黏蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.628,P0.05)。2.與空白對(duì)照組和空載對(duì)照組比較,TROP-2慢病毒組TROP-2基因和蛋白水平明顯升高;細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),TROP-2慢病毒組細(xì)胞變長(zhǎng),呈紡錘形,形態(tài)發(fā)生明顯變化;空白對(duì)照組和空載轉(zhuǎn)染組癌細(xì)胞呈鵝卵石形或多邊形。提示癌細(xì)胞可能發(fā)生了EMT。定量PCR和Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),與空白對(duì)照組和空載對(duì)照組比較,TROP-2慢病毒組波形蛋白和MMP-9基因和蛋白水平明顯升高,而E-鈣黏蛋白基因和蛋白水平明顯降低;平板克隆方法發(fā)現(xiàn),空白對(duì)照組、空載對(duì)照組和TROP-2慢病毒組克隆形成數(shù)分別為75±6、76±5和119±3(P0.05);劃痕修復(fù)試驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),空白對(duì)照組、空載對(duì)照組和TROP-2慢病毒組痕間間距分別為389±5(μm)、395±3(μm)和158±5(μm)(P0.01)。Transwell方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),空白對(duì)照組、空載對(duì)照組和TROP-2慢病毒組侵襲細(xì)胞數(shù)分別為89±4、92±5和139±6(P0.05)。3.采用NF-κB抑制劑PDTC處理TROP-2過(guò)表達(dá)細(xì)胞株后,定量PCR和Western Blot方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),與未用PDTC的慢病毒TROP-2組比較,波形蛋白和MMP-9基因和蛋白水平明顯降低,而E-鈣黏蛋白基因和蛋白水平明顯升高。結(jié)論1.TROP-2與EMT相關(guān)蛋白在結(jié)直腸癌組織中與侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。2.TROP-2通過(guò)誘導(dǎo)EMT發(fā)生,增強(qiáng)結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。3.NF-κB/MMP-9是TROP-2調(diào)控結(jié)腸癌細(xì)胞EMT的重要途徑之一。
【圖文】：

tin 蛋白在大腸癌中陽(yáng)性表達(dá)（×200） MMP-9 蛋白在大腸癌中陽(yáng)性表達(dá)（×圖 1 80 例結(jié)直腸癌組織免疫組化檢測(cè)的結(jié)果表1 TROP-2蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

圖 2 TROP-2 與患者生存回歸分析E-cadherin、Vimentin 和 MMP-9 在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)的相關(guān)性ROP-2 陽(yáng)性表達(dá)的結(jié)直腸癌患者中，Vimentin 陽(yáng)性表達(dá) 36 例，，E-cadh 例，MMP-9 陽(yáng)性表達(dá) 53 例。13 例 E-cadherin 陽(yáng)性表達(dá)的結(jié)直腸癌患者
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.35

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本文編號(hào)：2529000