【摘要】：Δ~9-硬脂酰-ACP脫氫酶(SAD)是決定植物體內飽和脂肪酸與不飽和脂肪酸比值的關鍵酶。以花生品種豫花9326基因組DNA為模板,通過基因組步移技術,克隆到花生Δ~9-硬脂酰-ACP脫氫酶基因(Ah SAD)起始密碼子ATG上游720 bp片段,利用5'RACE方法獲得了該基因的5'UTR序列,通過序列比對確定720 bp片段為Ah SAD啟動子區(qū)域。PLACE在線啟動子預測分析表明,該序列具有真核生物啟動子必需的核心元件TATA-box和CAAT-box,含有多個與光誘導和激素響應相關順式序列元件。將Ah SAD啟動子片段替換pBI121質粒中的CaMV35S啟動子驅動下游GUS基因表達,構建植物表達載體pBI-PAh SAD。通過農(nóng)桿菌介導法轉化擬南芥和在花生不同組織中瞬時表達,利用GUS組織化學染色研究其表達特性。表明在擬南芥和花生受體中,AhSAD啟動子主要調控下游基因在根、莖、葉片和子葉中表達,在花生的果針中也檢測到GUS活性;擬南芥的莖生葉只有葉脈中具有GUS活性,而花生整個葉片中都具有GUS活性。
[Abstract]:螖 ~ 9-stearyl-ACP dehydrogenase (SAD) is the key enzyme to determine the ratio of saturated fatty acids to saturated fatty acids in plants. Using genomic DNA of peanut variety Yuhua 9326 as template, 720 bp fragment upstream of (Ah SAD) initiation codon ATG of peanut 螖 ~ 9-stearyl-ACP dehydrogenase gene was cloned by genomic step technique. The 5'UTR sequence of peanut 螖 ~ 9-stearyl-ACP dehydrogenase gene was obtained by 5'RACE method. 720 bp fragment was identified as Ah SAD promoter region by sequence alignment. The sequence has the core elements TATA-box and CAAT-box, necessary for eukaryotic promoter to contain a number of sequence elements related to light induction and hormone response. The downstream GUS gene expression was driven by replacing the CaMV35S promoter in pBI121 plasmid with Ah SAD promoter fragment, and the plant expression vector pBI-PAh SAD. was constructed. The transient expression of Arabidopsis thaliana and peanut in different tissues was transformed by Agrobacterium tumefaciens. The expression characteristics of Arabidopsis thaliana and peanut were studied by GUS histochemical staining. The results showed that in Arabidopsis thaliana and peanut receptors, AhSAD promoter mainly regulated the expression of downstream genes in roots, stems, leaves and cotyledons, and also detected GUS activity in peanut fruit needles. Arabidopsis thaliana only had GUS activity in leaf veins, while peanut leaves had GUS activity in the whole leaf.
【作者單位】： 河南省農(nóng)業(yè)科學院經(jīng)濟作物研究所/農(nóng)業(yè)部黃淮海油料作物重點實驗室/河南省油料作物遺傳改良重點實驗室/花生遺傳改良國家地方聯(lián)合工程實驗室;
【基金】：國家高技術研究與發(fā)展計劃(863計劃)項目(2013AA102602-6) 河南省重大科技專項(141100110600) 國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術體系建設專項(CARS-14) 河南省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術體系建設項目(S2012-5) 河南省農(nóng)業(yè)科學院優(yōu)秀青年基金(2013YQ11)資助~~
【分類號】：S565.2

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本文編號：2506370