【摘要】：目的:探討甲狀旁腺激素相關蛋白(parathyroid hormone-related protein,PTHr P)基因的沉默對SPC-A-1BM細胞侵襲能力及其對細胞核因子κB受體活化因子配體(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)基因表達的影響。方法:本實驗共設置5個組,其中1-3組為實驗組(小si RNA干擾組,針對目的PTHr P基因設計3條不同序列的si RNA-PTHr P),4組:陰性對照組(非特異性陰性對照si RNA),5組:空白對照組(無si RNA干擾)。通過核酸轉染試劑脂質體Lipofectamine TM2000(Lipo2000)介導小干擾si RNA轉染高轉移性人肺腺癌細胞株(SPC-A-1BM)細胞;Transwell細胞遷移實驗用于檢測轉染后SPC-A-1BM細胞的侵襲能力;實時熒光定量聚合酶鏈反應(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)用于檢測轉染后PTHr P基因的RNA表達水平;Western-Blot方法檢測轉染后PTHr P及RANKL的表達水平。結果:轉染12小時后進行的Transwell試驗,顯示各組穿過Transwell人工膜并附著于上層小室底面的細胞,分別進行細胞計數,并進行統(tǒng)計分析。結果顯示PTHr P特異性轉染組(1組、2組、3組)與對照組(4組、5組)相比,穿過人工膜的數量明顯減少,抑制率分別為63.8%、60.3%、66.0%,經單因素方差分析,LSD法組間兩兩比較,結果顯示,實驗組1、實驗組2、實驗組3均和對照組4組及5組的差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),4組與5組間無明顯差異(P0.05);Real-time PCR實驗顯示,實驗組1組、2組及3組的PTHr P基因的表達顯著被抑制,抑制率分別為72%、75%、73%(P0.01),而對照組4組與5組之間對比,PTHr P基因的表達并沒有統(tǒng)計學差異;Western-Blot實驗顯示,對于PTHr P蛋白,實驗組1組、2組、3組的條帶灰度值之間無統(tǒng)計學差異(P0.05);4組、5組條帶之間無統(tǒng)計學差異(P0.05);無論1組、2組還是3組,它們的條帶灰度值與4組、5組對比,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。而對于RANKL蛋白而言,同樣的,1組、2組、3組的條帶灰度值之間無統(tǒng)計學差異,(P0.05);4組、5組條帶之間無統(tǒng)計學差異,(P0.05);無論1組、2組還是3組,它們的條帶灰度值與4組、5組對比,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。結論:利用RNAi技術轉染SPC-A-1BM細胞沉默PTHr P基因可明顯抑制腫瘤細胞的侵襲能力,并能減少RANKL蛋白的表達;本實驗為PTHr P介導的骨轉移瘤基因沉默療法提供了理論基礎,肺癌骨轉移的治療提供了新的治療靶點。
[Abstract]:Objective: to investigate the invasiveness of parathyroid hormone associated protein (parathyroid hormone-related protein,PTHr P) gene silencing on SPC-A-1BM cells and its effect on nuclear factor kappa B receptor activating factor ligand (receptor activator of nuclear factor- kappa B ligand,. Effect of RANKL) gene expression. Methods: five groups were set up in this experiment, of which 1 鈮，

本文編號：2489910