【摘要】：本研究對枯草芽孢桿菌中性蛋白酶的基因進(jìn)行克隆,并在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)。從枯草芽孢桿菌基因組克隆到編碼中性蛋白酶的全長基因,構(gòu)建大腸桿菌原核表達(dá)載體pET30b,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21得到重組工程菌。通過菌落PCR和酶切篩選驗(yàn)證重組體。在25℃,110 r/min條件下,用IPTG誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá)。表達(dá)蛋白用SDS-PAGE驗(yàn)證,并對酶活力進(jìn)行測定。測序結(jié)果表明克隆序列與NCBI上的登錄的序列同源性高達(dá)99%。SDS-PAGE結(jié)果表明誘導(dǎo)出的蛋白相對分子質(zhì)量56.6 kD,酶活力達(dá)到39 U/mL。證明成功克隆得到枯草芽孢桿菌中性蛋白酶基因,并在大腸桿菌中得到高效表達(dá)。
[Abstract]:......
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：四川省科技廳支撐計劃項(xiàng)目(2013GZX0160)資助
【分類號】：Q78;Q936

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本文編號：2472876