【摘要】：目的為了研究可溶性無機(jī)焦磷酸酶(soluble inorganic pyrophosphatase,s PPase)基因在滇重樓生長發(fā)育中的功能,對滇重樓的s PPase基因進(jìn)行了克隆、序列分析和原核表達(dá)研究。方法根據(jù)滇重樓c DNA文庫中篩選到的s PPase的EST序列,克隆了滇重樓可溶性無機(jī)焦磷酸酶基因Pps PPase的c DNA全長序列;運(yùn)用生物信息學(xué)的方法對該序列進(jìn)行相似性比較和同源性分析,預(yù)測編碼蛋白,并對其進(jìn)行各種理化性質(zhì)分析;將Pps PPase插入到原核表達(dá)載體p EASY-E1上,并導(dǎo)入到大腸桿菌BL21(DE3)細(xì)胞中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。結(jié)果滇重樓中Pps PPase的開放閱讀框ORF為621bp,編碼206個(gè)氨基酸,與高粱中s PPase的氨基酸序列相似性最高為94%;Pps PPase編碼的蛋白相對分子質(zhì)量是23.4k Da,理論等電點(diǎn)p I為5.6,特異識別區(qū)域即位于98-104位之間即DNDPMDV。成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體p EASY-E1-Pps PPase,并導(dǎo)入到大腸桿菌BL21(DE3)細(xì)胞中,經(jīng)SDS-PAGE分析表明Pps PPase在大腸桿菌中能夠表達(dá),當(dāng)IPTG誘導(dǎo)2h時(shí)表達(dá)量較高。結(jié)論首次從滇重樓中克隆得到可溶性無機(jī)焦磷酸酶基因Pps PPase,為滇重樓生長發(fā)育分子機(jī)制的研究提供參考。
[Abstract]:Objective to study the function of soluble inorganic pyrophosphatase (soluble inorganic pyrophosphatase,s PPase) gene in the growth and development of Polygonum yunnanensis, s PPase gene was cloned, sequenced and prokaryotic expression was studied. Methods according to the EST sequence of s PPase selected from c DNA library, the full length of c DNA sequence of soluble inorganic pyrophosphatase gene Pps PPase was cloned. Bioinformatics was used to compare the similarity and homology of the sequence, to predict the encoded protein, and to analyze its physical and chemical properties. The Pps PPase was inserted into the prokaryotic expression vector p EASY-E1 and induced into BL21 (DE3) cells. Results the open reading frame (ORF) of Pps PPase was 621 BP, encoding 206 amino acids, with the highest similarity to s PPase in sorghum. The relative molecular weight of the protein encoded by Pps PPase is 23.4k Da,. The theoretical isoelectric point Pi is 5.6. The specific recognition region is located between the 98-104 positions, that is, DNDPMDV.. A prokaryotic expression vector, p EASY-E1-Pps PPase, was successfully constructed and introduced into Escherichia coli BL21 (DE3) cells. SDS-PAGE analysis showed that Pps PPase could be expressed in E. coli, and the expression level was higher when IPTG was induced for 2 h. Conclusion the soluble inorganic pyrophosphatase (Pps PPase,) gene was cloned for the first time from Rhizoma Dianophora, which provides a reference for the study of molecular mechanism of growth and development of Rhizoma Dianophora.
【作者單位】： 云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81160502) 云南省自然科學(xué)基金(No.2011FZ153)
【分類號】：S567.239;Q943.2

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