【摘要】：【目的】通過研究蘋果樹腐爛病菌果膠裂解酶(pectate lyase,PL)基因Vmpl4敲除突變體的致病力、對(duì)果膠的利用和基因敲除后家族內(nèi)其他基因的表達(dá)水平變化,探明Vmpl4在致病過程中的作用�！痉椒ā坎捎胵 RT-PCR技術(shù)檢測Vmpl4在野生菌株03-8與寄主互作過程中的表達(dá)水平及Vmpl4敲除后PL家族內(nèi)其他基因的表達(dá)水平,通過Doublejoint PCR構(gòu)建基因敲除載體,并通過PEG介導(dǎo)原生質(zhì)體遺傳轉(zhuǎn)化獲取轉(zhuǎn)化子、PCR及Southern blot驗(yàn)證基因敲除突變體。利用蘋果葉片和枝條離體接種方法檢測突變體致病力;接種至PDA及果膠培養(yǎng)基,觀察突變體的營養(yǎng)生長和對(duì)果膠的利用情況�！窘Y(jié)果】Vmpl4在病菌侵染過程中上調(diào)表達(dá)高達(dá)10.20倍;通過驗(yàn)證得到1個(gè)基因敲除突變體,其在葉片和枝條上的致病力均顯著降低,在果膠培養(yǎng)基上生長速率也明顯降低,Vmpl4敲除后家族內(nèi)4個(gè)基因在病菌侵染過程中表達(dá)水平顯著上調(diào)。【結(jié)論】果膠裂解酶基因Vmpl4通過降解果膠參與致病過程,PL家族內(nèi)其他基因與Vmpl4在病菌致病性方面共同發(fā)揮作用。
[Abstract]:[objective] to study the pathogenicity of Vmpl4 knockout mutants of Pectin lyase (pectate lyase,PL) gene of apple tree rot pathogen, and to investigate the changes of Pectin utilization and the expression level of other genes in the family after gene knockout. [methods] Q RT-PCR technique was used to detect the expression level of Vmpl4 in the interaction between wild strain 03-8 and host, and the expression level of other genes in PL family after Vmpl4 knockout. The gene knockout vector was constructed by Doublejoint PCR, and the transformant was obtained by PEG mediated protoplast genetic transformation. The mutant was verified by PCR and Southern blot. The virulence of the mutant was detected by in vitro inoculation of apple leaves and branches. After inoculation with PDA and pectin medium, the nutrient growth and utilization of pectin were observed. [results] the expression of Vmpl4 was up to 10.20 times during infection. The pathogenicity of a gene knockout mutant was significantly decreased in leaves and branches, and the growth rate in pectin medium was also significantly decreased. The expression of four genes in the family after Vmpl4 knockout was significantly up-regulated during infection. [conclusion] Pectin lyase gene Vmpl4 is involved in the pathogenicity through the degradation of pectin. Other genes in the PL family and Vmpl4 play a role in pathogenicity.
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院·旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31171796和31471732) 國家公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201203034) 高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)基金(20120204110002)
【分類號(hào)】：S436.611.11

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