【摘要】：[目的]通過聯(lián)合亞硫酸氫鈉的限制性內切酶分析法技術(COBRA),定性檢測乳腺癌及癌旁正常組織中PANDAR基因DNA甲基化的情況,再通過熒光定量甲基化PCR (QM-PCR)技術對乳腺癌和癌旁正常組織中PANDAR基因DNA甲基化數值進行定量檢測并分析,探討PANDAR基因在乳腺癌中DNA甲基化的臨床意義。[方法]收集乳腺癌及癌旁正常組織30對,所采集癌旁正常乳腺組織距離腫塊至少不小于5cm,并且可在不同象限取材,分別提取DNA,采用聯(lián)合亞硫酸氫鈉的限制性內切酶分析法(COBRA)檢測乳腺癌組織和癌旁組織的PANDAR基因DNA甲基化的大致情況,采用QM-PCR技術對乳腺癌組織和癌旁正常組織PANDAR基因DNA甲基化的程度定量檢測,使用spssl7.0軟件對實驗數據進行處理,結果行統(tǒng)計學分析。[結果]1. COBRA技術檢測30例乳腺癌組織中以及癌旁正常組織中,經Bsp119I酶酶切后乳腺癌組織中PANDAR出現DNA甲基化程度高于50%的有28例,甲基化程度低于50%的有2例。P=1；經HinfI酶酶切后乳腺癌組織中PANDAR出現DNA甲基化程度高于50%的有30例,甲基化程度低于50%的有0例。P=10.05,差異均無統(tǒng)計學意義。2.經過熒光定量甲基化PCR (QM-PCR)技術檢測30例乳腺癌組織中以及癌旁正常組織中,PANDAR基因出現DNA甲基化的比例為74%,癌旁正常組織出現DNA甲基化的比例為68%, P=0.00690.05,差異有統(tǒng)計學意義。[結論]1.在30例乳腺癌組織中可見PANDAR基因啟動子CpG島甲基化水平高于癌旁正常組織。以上結果提示：DNA甲基化與PANDAR基因在乳腺癌組織中高表達是有相關性的。2.乳腺癌組織中PANDAR基因DNA甲基化的水平較癌旁正常乳腺組織明顯升高,PANDAR基因啟動子CpG島的甲基化狀態(tài)與該基因在乳腺癌組織中高表達有關,提示PANDAR基因DNA甲基化可能是一個較有價值的分子標志,其甲基化水平可能會成為檢測乳腺癌的新的特異性指標,在乳腺癌的發(fā)生過程中起重要作用,并可能成為治療乳腺癌的特異性潛在生物靶點。
[Abstract]:[objective] to qualitatively detect the DNA methylation of PANDAR gene in breast cancer and adjacent normal tissues by (COBRA), combined with sodium bisulfite restriction endonuclease assay. The value of DNA methylation of PANDAR gene in breast cancer and adjacent normal tissues was quantitatively detected and analyzed by fluorescence quantitative methylation PCR (QM-PCR). The clinical significance of PANDAR gene in DNA methylation in breast cancer was discussed. [methods] A total of 30 pairs of breast cancer and adjacent normal tissues were collected. The distance between the adjacent normal breast tissues and the mass was not less than 5 cm, and DNA, could be extracted from different quadrants. The DNA methylation of PANDAR gene in breast cancer tissues and adjacent tissues was detected by restriction endonuclease assay (COBRA) combined with sodium bisulfite. The degree of DNA methylation of PANDAR gene in breast cancer tissues and adjacent normal tissues was quantitatively detected by QM-PCR technique. The experimental data were processed by spssl7.0 software. The results were statistically analyzed. [result] 1. COBRA technique was used to detect DNA methylation in 30 breast cancer tissues and adjacent normal tissues. 28 cases of breast cancer tissues with DNA methylation more than 50% and 2 cases with less than 50% DNA methylation were detected by Bsp119I enzyme digestion. There were 30 cases with PANDAR methylation higher than 50% and 0 cases with less than 50% DNA methylation in breast cancer tissues digested by HinfI enzyme. There was no significant difference between the two groups. 2. By fluorescence quantitative methylation PCR (QM-PCR) technique, the percentage of DNA methylation in 30 breast cancer tissues and adjacent normal tissues was 74%, and that of DNA methylation in adjacent normal tissues was 68%. The difference was statistically significant. [conclusion] 1. In 30 cases of breast cancer, CpG island methylation level of PANDAR promoter was higher than that of adjacent normal tissues. These results suggest that DNA methylation is associated with the overexpression of PANDAR gene in breast cancer. The level of DNA methylation of PANDAR gene in breast cancer tissues was significantly higher than that of adjacent normal breast tissues. The methylation status of CpG island of PANDAR gene promoter was related to the high expression of PANDAR gene in breast cancer tissues. The results suggest that DNA methylation of PANDAR gene may be a valuable molecular marker, and its methylation level may become a new specific marker for detection of breast cancer and play an important role in the pathogenesis of breast cancer. It may be a potential biological target for the treatment of breast cancer.
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

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