【摘要】：團頭魴(Megalobrama amblycephala)是我們國家在淡水養(yǎng)殖魚類中占有舉足輕重地位的一個優(yōu)良品種,近些年,由于養(yǎng)殖規(guī)模的擴大化,養(yǎng)殖環(huán)境的惡化,集約化養(yǎng)殖程度的大幅度提高,各類疾病頻發(fā)。其中,對團頭魴影響最大的就是由嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)感染引起的細菌性敗血癥,可導致魚體大量死亡。目前,還沒有快速有效的方法對其進行預防和治療。本研究用嗜水氣單胞菌感染團頭魴區(qū)分抗病和易感組,通過PCR擴增及測序在MHC Ⅱα基因上篩選單核苷酸多態(tài)位點(Single nucleotide polymorphisms,SNP),利用高分辨率溶解曲線法和限制性內(nèi)切酶酶切法對SNP進行分型,分析其多態(tài)性及與抗病性狀之間的關系。在MHC Ⅱα基因上共篩選出35個候選SNP位點,占MHC Ⅱα基因總堿基的1.45%,包含30個轉(zhuǎn)換位點,5個顛換位點。其中外顯子部分有16個,內(nèi)含子部分7個,5'非編碼區(qū)有1個,3'非編碼區(qū)有11個。有13個SNP位點位于編碼區(qū),占總氨基酸位點的5.56%,位于839 bp的T/A顛換和1663 bp的A/G轉(zhuǎn)換是無義突變,其余11個SNP位點為有義突變。MHC Ⅱα基因的21個抗原結(jié)合位點(Peptide binding region,PBR)中,有4個位點變異,變異率為19.05%;而non-PBR的變異率僅為8.20%(5/61)。結(jié)果證實團頭魴MHC Ⅱα基因含有豐富的多態(tài)位點、具有極高的特異性且對蛋白質(zhì)的結(jié)構和功能產(chǎn)生了一定影響。α1結(jié)構域的SNP位點分別占總堿基和總氨基酸位點的4.88%和10.98%,明顯高于α2結(jié)構域的1.08%和3.22%。這是由于α1結(jié)構域存在的抗原肽結(jié)合區(qū)具有高度的多態(tài)性,再次證實PBR位點存在于α1結(jié)構域。表明抗原結(jié)合位點區(qū)域的多態(tài)性高于非抗原結(jié)合位點的多態(tài)性,同時也表明氨基酸的替代、替換集中出現(xiàn)在多肽結(jié)合位點上。NJ(Neighbor-joining)法構建的系統(tǒng)進化樹中,團頭魴MHC Ⅱα基因和數(shù)量眾多的硬骨魚類集聚成為一個分支,側(cè)面說明了硬骨魚類應該是單系起源的;另外,硬骨魚又一分為二,團頭魴和別的鯉科魚類分了一支,鮭鱒魚類為另外一支,二者獨自進化,互不影響。由此可見,團頭魴與鯉科魚類中的草魚(Ctenopharyngodon idella)關系最近,與斑馬魚(Danio rerio)、建鯉(Crprinus carpio jian)的關系稍遠,與大西洋鮭(Salmo salar)、虹鱒(Oncorhynchus mykiss)的關系較遠,與其他脊椎動物、哺乳動物的關系最遠。對分型成功的5個SNP位點在易感和抗病組中各100尾魚的基因型頻率和等位基因頻率進行了統(tǒng)計。通過卡方檢驗分析發(fā)現(xiàn)位于1395 bp(T/A)位點的基因型頻率和等位基因頻率在易感和抗病組中差異極顯著(P0.01),位于221bp(G/T)和1859 bp(G/T)位點的基因型頻率和等位基因頻率在易感組和抗病組中差異顯著(P0.05)。其中位于第三外顯子1395bp(T/A)位點的突變導致天冬氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)楣劝彼?引起了蛋白質(zhì)結(jié)構和功能的改變,進而改變了魚體的抗病性。位于5'非編碼區(qū)221bp(G/T)位點和位于3'非編碼區(qū)1859bp(G/T)位點的突變沒有導致氨基酸改變,但實驗結(jié)果卻顯示與抗病關聯(lián)。本研究結(jié)果表明團頭魴MHC Ⅱα基因的多態(tài)性和抗細菌性敗血癥性狀顯著關聯(lián),進一步分析表明,純合個體對嗜水氣單胞菌引起的細菌性敗血病抗性更高。本實驗初步分析獲得的相關SNP標記及相應的優(yōu)勢、劣勢基因型,能夠在進行團頭魴抗病育種工作時為親本的選擇提供理論依據(jù),也為分子遺傳標記和團頭魴抗病基因篩選奠定理論基礎。
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【學位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S917.4

【參考文獻】

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1 耿昕穎;王家禎;王巍;單曉楓;馬紅霞;高云航;;魚類MHC及其基因的研究進展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2015年25期

2 陸春云;習丙文;葉詩堯;梁利國;謝駿;;多個環(huán)境因素對嗜水氣單胞菌感染團頭魴致病力的影響[J];生態(tài)學雜志;2015年07期

3 胡丹丹;劉哲;;MHC基因在魚類遺傳育種中的研究與應用[J];水產(chǎn)學雜志;2013年03期

4 楊玲;孟慶磊;張龍崗;張志山;安麗;董學颯;劉羽清;付佩勝;;草魚MHC class Ⅰ基因多態(tài)性及其與魚體抗柱形病能力關系分析[J];長江大學學報(自科版);2013年17期

5 夏飛;梁利國;謝駿;;團頭魴病原嗜水氣單胞菌的分離鑒定及藥敏試驗[J];水產(chǎn)科學;2012年10期

6 龐紀彩;高風英;盧邁新;朱華平;可小麗;黃樟翰;;魚類MHCII類基因及其研究進展[J];廣東農(nóng)業(yè)科學;2012年03期

7 李雪松;劉至治;趙雪錦;馬曉茜;馮維;王成輝;;“全紅”體色甌江彩鯉MHC-DAB基因多態(tài)性及其與魚體抗病力關系的分析[J];水產(chǎn)學報;2011年09期

8 董忠典;周芬娜;王慧;;MHC基因的遺傳變異及其與魚類抗病性研究進展[J];水生態(tài)學雜志;2011年02期

9 馬曉茜;劉至治;李思發(fā);唐文喬;楊金權;;團頭魴主要組織相容性復合體Ⅰ類基因全長cDNA的克隆及組織表達分析[J];上海海洋大學學報;2011年01期

10 茅莉娜;馮娟;李玉谷;侯月娥;郭志勛;許海東;;軍曹魚MHC-Ⅱα基因全長cDNA的克隆及其組織表達分析[J];中國畜牧獸醫(yī);2010年10期

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1 成述儒;藏綿羊DQA1、DQA2和DRB3基因多態(tài)性與單倍型連鎖分析[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2010年

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1 邢賀飛;半滑舌鰨抗病相關SNP標記的篩選及兩種免疫相關基因的克隆與初步分析[D];上海海洋大學;2015年

2 楊娟;虹鱒MHC Ⅱ類β基因（DAB）多態(tài)性及其與抗IHN相關性分析[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2014年

3 葛辰;大鱗副泥鰍轉(zhuǎn)錄組分析、SNP開發(fā)及生長相關分子標記的篩選[D];蘇州大學;2014年

4 劉俊;興國紅鯉和荷包紅鯉MHC Ⅱ類基因多態(tài)性、表達及其與魚體抗病力關系的分析[D];上海海洋大學;2014年

5 逄錦菲;“黃海2號”中國對蝦高通量SNP篩選及其與抗WSSV性狀的關聯(lián)分析[D];上海海洋大學;2013年

6 杜佳瑩;赤點石斑魚MHC基因的克隆與多態(tài)性分析[D];廈門大學;2008年

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本文編號：2372246