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厚藤cDNA文庫(kù)的構(gòu)建和重金屬鎘耐受相關(guān)基因的篩選

發(fā)布時(shí)間:2018-11-07 07:27
【摘要】:厚藤(Ipomoea pes-caprae(L.)Sweet)是一種具有重要生態(tài)、觀賞及藥用價(jià)值的沙灘植物,對(duì)重金屬鎘(Cd)具有一定的富集能力,可作為Cd污染濱海地區(qū)的修復(fù)植物進(jìn)行引種栽植和利用。本研究通過(guò)Gateway技術(shù)構(gòu)建厚藤的cDNA文庫(kù),將該文庫(kù)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母對(duì)Cd敏感的突變株ycf1Δ,采用全長(zhǎng)cDNA過(guò)表達(dá)基因捕獲系統(tǒng)(FOX)篩選厚藤重金屬Cd脅迫耐受相關(guān)基因,并采用酵母互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行基因的功能驗(yàn)證。本研究獲得了2個(gè)能夠恢復(fù)ycf1Δ對(duì)Cd敏感表型的重組質(zhì)粒,經(jīng)測(cè)序分析,該重組質(zhì)粒包含的cDNA全長(zhǎng)序列分別對(duì)應(yīng)厚藤植物螯合肽合成酶基因(phytochelatin synthase)和金屬硫蛋白基因(metallothionein),分別將其命名為Ip PCS和Ip MT,通過(guò)功能分析,初步認(rèn)定該基因?yàn)榫幋aCd耐受和解毒相關(guān)蛋白的候選基因。
[Abstract]:Ipomoea pes-caprae (L.) Sweet) is a kind of beach plant with important ecological, ornamental and medicinal value. It has certain enrichment ability to cadmium (Cd). It can be used as a repair plant in coastal areas polluted by Cd. In this study, the cDNA library was constructed by Gateway technique. The plasmid was transformed into the mutant ycf1 螖, which was sensitive to Cd. The full-length cDNA overexpression gene capture system (FOX) was used to screen the genes related to Cd stress tolerance. The function of the gene was verified by yeast complementary experiment. In this study, two recombinant plasmids capable of restoring ycf1 螖 sensitive phenotype to Cd were obtained. By sequencing, the full length cDNA sequence of the recombinant plasmid was found to correspond to the chelate peptide synthase gene (phytochelatin synthase) and the metallothionein gene (metallothionein), respectively. They were named Ip PCS and Ip MT, respectively by functional analysis and identified as candidate genes encoding Cd tolerance and detoxification related proteins.
【作者單位】: 中國(guó)科學(xué)院華南植物園廣東省應(yīng)用植物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國(guó)科學(xué)院大學(xué);
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31271702,31570257) 中國(guó)科學(xué)院A類戰(zhàn)略性先導(dǎo)科技專項(xiàng)(XDA13020500) 國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2016YFC1403002) “十二五”農(nóng)村領(lǐng)域國(guó)家科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015BAL04B04)資助~~
【分類號(hào)】:Q943.2

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本文編號(hào):2315643


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