【摘要】：在水產(chǎn)養(yǎng)殖的生產(chǎn)管理中,操作脅迫是魚類不可避免的一類應激因子,它包括換水、吸污、拉網(wǎng)、捕捉、離水、運輸?shù)榷鄠�環(huán)節(jié),這些操作往往會對魚體造成一定脅迫,進而引發(fā)魚體代謝、內(nèi)分泌、免疫系統(tǒng)等一系列的應激反應,給魚類帶來了巨大的負面影響。本試驗以飼養(yǎng)在溫室水泥池內(nèi)性成熟的體質(zhì)量(683.53±22.10)g的美洲鰣(Alosasapidissima)親魚為研究對象,分別開展空氣暴露和運輸脅迫試驗,通過檢測應激前后美洲鰣親魚血液生理生化、組織酶活、激素以及組織hsp70mRNA水平等多項指標,研究空氣暴露和運輸脅迫對美洲鰣親魚生理生化及機能的影響。1.空氣暴露對美洲鰣親魚多項生理生化指標產(chǎn)生顯著影響。試驗設置不進行空氣暴露處理的對照組和空氣暴露時間為15s、30s、60s三個不同強度處理組。美洲鰣親魚在空氣暴露試驗后其紅細胞數(shù)量、紅細胞壓積、血紅蛋白含量、血清過氧化氫酶、甲狀腺素均有顯著下降(P0.05);血糖、總膽固醇、甘油三酯、總蛋白、K+、Ca2+、超氧化物歧化酶、丙二醛、溶菌酶、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、皮質(zhì)醇激素等均出現(xiàn)顯著升高(P0.05);而紅細胞平均血紅蛋白含量、Na+、Cl-、三碘甲腺原氨酸等指標并無顯著變化(P0.05)。鰓組織超氧化物歧化酶及過氧化氫酶活力在空氣暴露15s、60s組均出現(xiàn)顯著降低(P0.05);肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶水平在空氣暴露30s、60s顯著升高(P0.05),肝糖元含量顯著下降(P0.05);心臟肌酸激酶僅在60s空氣暴露組出現(xiàn)升高(P0.05),乙酰膽堿酯酶活力在15s、60s空氣暴露組均顯著下降(P0.05)。2.運輸脅迫對美洲鰣親魚多項生理生化指標亦產(chǎn)生顯著影響。與運輸前(運輸0h)相比,實驗組美洲鰣親魚的紅細胞數(shù)量、紅細胞壓積、血紅蛋白含量、甘油三酯、血清超氧化物歧化酶、甲狀腺素等在運輸2h、4h均有顯著下降(P0.05);實驗組血糖、總膽固醇、K+、Cl-、丙二醛、溶菌酶、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、皮質(zhì)醇激素、三碘甲腺原氨酸等在運輸2h、4h出現(xiàn)顯著升高(P0.05);而實驗組紅細胞平均血紅蛋白含量、Na+、Ca2+、過氧化氫酶與運輸前相比并無明顯差異(P0.05)。鰓組織Na+-K+-ATP酶和過氧化氫酶活力在運輸2h、4h時出現(xiàn)顯著下降(P0.05);肝組織過氧化氫酶、糖原含量在運輸后出現(xiàn)顯著下降(P0.05),肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶水平顯著升高(P0.05);心臟肌酸激酶在運輸4h時出現(xiàn)顯著上升(P0.05),乙酰膽堿酯酶活力在運輸4h時出現(xiàn)明顯下降(P0.05)�？梢�,運輸應激能影響美洲鰣親魚的生理機能,使其鰓、肝、心臟出現(xiàn)一定程度的損傷。3.運用同源克隆和cDNA末端快速擴增技術(shù)獲取了美洲鰣熱應激蛋白70(Heat Shock Protein70,HSP70)的全長cDNA序列,其總長度為2 545 bp,開放閱讀框區(qū)為1914 bp,推測編碼637個氨基酸,其氨基酸的二級結(jié)構(gòu)含有HSP70家族的3個特征序列。氨基酸同源性分析顯示,美洲鰣HSP70與墨西哥脂鯉(Astyanax mexicanus)等魚類的相似性達84%以上,與無脊椎動物果蠅、大腸桿菌的相似性分別為73%和38%,表明其基因在進化上具有很高的保守性。4.熒光定量PCR檢測hsp70基因在各組織中的表達分布,該基因在美洲鰣鰓、肌肉、頭腎中高表達,在腦和心臟中相對高表達,在肝臟、脾臟、腸、腎臟中微量表達。本研究中不同強度空氣暴露脅迫后并未引起hsp70 mRNA在鰓、頭腎中的明顯變化(P0.05),肝臟hs70 mRNA水平在15s、30s、60s空氣暴露組均有顯著升高(P0.05),而其升高幅度并不與操作脅迫的強度呈正相關(guān)。運輸應激過程中鰓、肝臟hsp70mRNA水平呈先升高后降低的變化趨勢,頭腎hsp70 mRNA水平呈現(xiàn)遞增趨勢。綜上表明,空氣暴露和運輸脅迫對美洲鰣親魚血液多項生理和生化指標以及鰓、肝、心臟組織酶活指標等均造成一定的影響。魚體的呼吸及循環(huán)系統(tǒng)功能在應激后出現(xiàn)減弱,氧化應激反應導致了鰓、肝、心臟等組織受損。肝臟hsp70基因在空氣暴露和運輸脅迫下具有較好的應答,但鑒于hsp70基因?qū)Σ煌瑧ぴ磻鸬膹碗s性,仍需要進一步研究其在多種應激源下的反應,以便將其合理應用來提高魚體抗性。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S917.4

【參考文獻】

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本文編號：2290737