【摘要】：小麥?zhǔn)俏覈?guó)的主要糧食作物。小麥紋枯病是由禾谷絲核菌(Rhizoctonia cerealis)引起的小麥重要土傳病害。凍害是影響小麥生長(zhǎng)最主要的自然災(zāi)害之一。生產(chǎn)上,抗紋枯病、兼抗紋枯病與凍害小麥品種較為匱乏,因此分離克隆抗紋枯、耐凍害相關(guān)基因,研究其功能,為抗紋枯病及凍害育種提供理論基礎(chǔ),具有重要意義。本研究通過(guò)構(gòu)建表達(dá)載體p20-Rssp2897:6MYC-TaCAD12、pAHC25-MYC-TaPK-R1,用基因槍轉(zhuǎn)化法獲得轉(zhuǎn)TaCAD12、TaPK-R1基因小麥。獲得以下研究結(jié)果：轉(zhuǎn)TaCAD12基因小麥的研究結(jié)果：(1)對(duì)轉(zhuǎn)TaCAD12基因小麥To-T2代進(jìn)行PCR以及qRT-PCR分析,獲得5個(gè)轉(zhuǎn)TaCAD12基因小麥株系。(2)用Western blot分析5個(gè)轉(zhuǎn)TaCAD12基因小麥株系中的陽(yáng)性植株,結(jié)果表明這5個(gè)轉(zhuǎn)基小麥株系中c-MYC-TaCAD12融合蛋白均被表達(dá)。(3)用WK207、R0301分別對(duì)轉(zhuǎn)TaCAD12基因小麥T1、T2代進(jìn)行接種,于收獲期進(jìn)行紋枯病鑒定,結(jié)果表明,在轉(zhuǎn)基因小麥中過(guò)量表達(dá)TaCAD12基因,能提高對(duì)不同來(lái)源及致病力禾谷絲核菌的抗性。轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥的研究結(jié)果：(1)對(duì)轉(zhuǎn)TaPK-Rl基因小麥To-T4代進(jìn)行PCR、 RT-PCR以及qRT-PCR分析,獲得3個(gè)轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥株系。(2)利用Western blot分析3個(gè)轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥株系中的陽(yáng)性植株,結(jié)果表明這3個(gè)轉(zhuǎn)基因小麥株系中c-MYC-TaPK-R1融合蛋白均被表達(dá)。(3)對(duì)T4代轉(zhuǎn)基因小麥及受體進(jìn)行低溫處理,統(tǒng)計(jì)存活率、測(cè)定脯氨酸和電解質(zhì)滲漏率含量,結(jié)果表明,過(guò)量表達(dá)TaPK-R1基因提高了轉(zhuǎn)基因小麥對(duì)寒冷環(huán)境的適應(yīng)性。(4)用R0301對(duì)轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥T1、T2代進(jìn)行接種及紋枯病鑒定,用WK207對(duì)轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥T3、T4代進(jìn)行接種及紋枯病鑒定,抗紋枯病鑒定結(jié)果表明,在轉(zhuǎn)基因小麥中過(guò)表達(dá)TaPK-R1基因,能在不同程度上提高小麥對(duì)不同菌株禾谷絲核菌的抗性。(5)經(jīng)過(guò)分子檢測(cè)與接種抗病鑒定、低溫脅迫處理,創(chuàng)制、選育出兼抗紋枯病與凍害的轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥新種質(zhì)3份。
[Abstract]:Wheat is the main food crop in China. Wheat sheath blight is an important soil-borne disease of wheat caused by Rhizoctonia graminearum (Rhizoctonia cerealis). Freezing injury is one of the most important natural disasters affecting wheat growth. In the production of wheat varieties resistant to sheath blight and freezing injury, it is of great significance to isolate and clone the genes related to resistance to grain blight and freeze injury, to study its function, and to provide a theoretical basis for breeding for resistance to sheath blight and freezing injury. In this study, the expression vector p20-Rssp2897: 6MYC-TaCAD12 (pAHC25-MYC-TaPK-R1) was constructed, and the transgenic wheat was obtained by gene gun transformation. The following results were obtained: (1) PCR and qRT-PCR analysis were carried out on the To-T2 generation of TaCAD12 transgenic wheat, and 5 TaCAD12 transgenic wheat lines were obtained. (2) Western blot was used to analyze the positive plants in 5 TaCAD12 transgenic wheat lines. The results showed that the c-MYC-TaCAD12 fusion protein was expressed in all of the five transgenic wheat lines. (3) WK207,R0301 was used to inoculate the T _ 1 / T _ 2 generation of the transgenic wheat with TaCAD12 gene and identify the sheath blight at the harvest stage. The results showed that the TaCAD12 gene was overexpressed in the transgenic wheat. It can improve the resistance to Rhizoctonia graminearum from different sources and pathogenicity. The results were as follows: (1) three TaPK-R1 transgenic wheat lines were obtained by PCR, RT-PCR and qRT-PCR analysis on the To-T4 generation of TaPK-Rl transgenic wheat. (2) Western blot was used to analyze the positive plants in three TaPK-R1 transgenic wheat lines. The results showed that the c-MYC-TaPK-R1 fusion protein was expressed in all three transgenic wheat lines. (3) the low temperature treatment of T4 generation transgenic wheat and its receptor were used to calculate the survival rate and the content of proline and electrolyte leakage. Overexpression of TaPK-R1 gene improved the adaptability of transgenic wheat to cold environment. (4) inoculation and identification of sheath blight in T _ 1 and T _ 2 generation of transgenic wheat with TaPK-R1 gene were carried out with R0301, and inoculation and identification of sheath blight in T _ 3 and T _ 4 generation of transgenic wheat with TaPK-R1 gene with WK207. The results of identification of resistance to sheath blight showed that overexpression of TaPK-R1 gene in transgenic wheat could improve the resistance of wheat to different strains of Rhizoctonia graminearum to varying degrees. (5) the resistance to Rhizoctonia graminearum was identified by molecular detection and inoculation. Three new wheat germplasms with TaPK-R1 gene were selected, which were resistant to sheath blight and freezing injury.
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S512.1

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6 潘潔 羅崢曦;阿根廷試水轉(zhuǎn)基因小麥[N];糧油市場(chǎng)報(bào);2013年

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9 通訊員 嚴(yán)玉聽;印度種子公司謀化開發(fā)轉(zhuǎn)基因小麥和水稻[N];農(nóng)資導(dǎo)報(bào);2010年

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