【摘要】：印記基因是一類(lèi)親本來(lái)源特異性表達(dá)的基因,大部分印記基因在胚胎發(fā)育、胎盤(pán)形成以及個(gè)體生活過(guò)程中扮演著重要角色。P57是周期蛋白激酶抑制劑,是一個(gè)典型的抑癌基因,同時(shí)也是一個(gè)父本印記、母本表達(dá)的印記基因,其缺失會(huì)帶來(lái)胚胎致死。P57免疫熒光染色顯示其蛋白在乳腺組織中廣泛表達(dá),RT-PCR結(jié)果表明它在乳腺形態(tài)變化的4個(gè)時(shí)期中表達(dá)量呈下降趨勢(shì)。為了研究P57在乳腺發(fā)育過(guò)程中是否起到了作用,本文在乳腺細(xì)胞中設(shè)計(jì)了兩種shRNA的對(duì)P57進(jìn)行了敲除,發(fā)現(xiàn)P57通過(guò)影響乳腺上皮細(xì)胞的干性來(lái)影響增殖,RT結(jié)果顯示其干細(xì)胞信號(hào)通路的相關(guān)基因表達(dá)水平明顯降低,然而周期檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其G1期的細(xì)胞比例下降。通過(guò)對(duì)臨近LncRNA Kcnq1ot1進(jìn)行敲除可以使P57的表達(dá)量顯著上調(diào),但對(duì)PRC2復(fù)合物成員Suz12敲除雖然可以降低Kcnq1ot1的表達(dá),但P57的變化趨勢(shì)卻不穩(wěn)定。在對(duì)P57進(jìn)行敲除后,RT檢測(cè)到另外15個(gè)印記基因的表達(dá)水平也發(fā)生顯著變化,驗(yàn)證了乳腺細(xì)胞中印記基因網(wǎng)絡(luò)的存在。
[Abstract]:Imprinted genes are a class of genes specifically expressed by their parents. Most imprinted genes play an important role in embryonic development, placenta formation and individual life. P57 is a cyclin kinase inhibitor and a typical tumor suppressor gene. It's also a paternal imprint, the imprinted gene expressed by the mother. The results of RT-PCR showed that the expression of P57 protein decreased in the four stages of mammary gland morphological changes. In order to study whether P57 plays a role in breast development, we designed two kinds of shRNA to knock out P57 in mammary gland cells. It was found that P57 affected the proliferation of mammary epithelial cells by affecting the dryness of mammary epithelial cells. The results showed that the expression level of genes related to stem cell signaling pathway was significantly decreased, but the proportion of cells in G1 phase was decreased by cycle detection. The expression of P57 could be upregulated significantly by knockout of adjacent LncRNA Kcnq1ot1, but Suz12 knockout of PRC2 complex member could decrease the expression of Kcnq1ot1, but the change trend of P57 was not stable. The expression level of the other 15 imprinted genes was also significantly changed by RT after p57 knockout, which confirmed the existence of imprinted gene network in breast cells.
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：Q78

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本文編號(hào)：2213319