【摘要】：以玳玳花瓣為材料,采用RT-PCR和RACE技術,克隆了玳玳HPL基因cDNA全長,全長為1 776 bp,其中包含52 bp的5′非編碼區(qū),224 bp的3′非編碼區(qū),1 500 bp的編碼區(qū)(編碼499個氨基酸,分子量為55.7 ku)。將該HPL基因cDNA編碼區(qū)的核苷酸序列及所推導的氨基酸序列與其他植物的HPL基因cDNA序列進行比較,推斷玳玳花瓣HPL屬于13-HPL類。通過PCR擴增得到了玳玳HPL基因組全長。測序結果顯示玳玳HPL基因中包含1個長2 374 bp的內(nèi)含子。將分離出來的玳玳HPL基因cDNA的編碼區(qū)序列插入pET-15b載體上構建原核表達載體,在細菌BL21細胞中進行原核表達。結果表明:該編碼區(qū)片段可在原核細胞中大量表達,其表達產(chǎn)物分子量大小約為55 ku,與13-HPL蛋白的分子量55.7 ku相符。本研究為下一步利用HPL基因cDNA進行遺傳轉化研究奠定基礎,將為花卉香味的遺傳改良提供一條新途徑。
[Abstract]:The cDNA of the HPL gene was cloned by RT-PCR and RACE techniques. The total length of cDNA was 1 776 bp, which contained the coding region of 1 500 bp (encoding 499 amino acids) in the 5'non-coding region of 52 bp and the 3'noncoding region of 224bp. Molecular weight is 55.7 ku). The nucleotide sequence and deduced amino acid sequence of the cDNA coding region of the HPL gene were compared with the cDNA sequence of the HPL gene of other plants, and it was inferred that HPL belongs to 13-HPL class. The whole genome of HPL was amplified by PCR. The sequencing results showed that the HPL gene contained a 2 374 bp intron. The coding region of cDNA of HPL gene was inserted into pET-15b vector to construct prokaryotic expression vector, which was expressed in bacterial BL21 cells. The results showed that the coding region could be expressed in prokaryotic cells, and the molecular weight of the expressed product was about 55 ku, and the molecular weight of 13-HPL protein was 55.7 ku. This study laid a foundation for the further study of genetic transformation using HPL gene cDNA, and will provide a new way for genetic improvement of flower fragrance.
【作者單位】： 福建農(nóng)林大學園藝產(chǎn)品貯藏保鮮研究所;
【分類號】：S685.99

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本文編號：2211503