轉(zhuǎn)基因克隆奶山羊大量生產(chǎn)重組人的抗凝血酶Ⅲ蛋白質(zhì)(rhATⅢ)
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《生物工程學(xué)報》 2008年01期
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轉(zhuǎn)基因克隆奶山羊大量生產(chǎn)重組人的抗凝血酶Ⅲ蛋白質(zhì)(rhATⅢ)
【摘要】:利用轉(zhuǎn)基因克隆奶山羊乳腺生物反應(yīng)器大量生產(chǎn)重組人的抗凝血酶Ⅲ(rhATⅢ)蛋白質(zhì)。其中包括:篩選出人的抗凝血酶Ⅲ蛋白基因的cDNA序列;利用山羊的β-酪蛋白基因的啟動區(qū),終止信號和Enterokinase蛋白酶酶切DNA序列,構(gòu)建在乳腺中特異表達rhATⅢ的表達載體。同時在轉(zhuǎn)基因載體的末端連接一個新酶素篩選基因(Neomycin)。再以細胞轉(zhuǎn)染、G418篩選和體細胞核移植(動物克隆)等過程,最后獲得含有人的抗凝血酶Ⅲ基因的轉(zhuǎn)基因克隆奶山羊。我們共獲得了5個原代轉(zhuǎn)基因公羊。第一只克隆羊在出生后78 d死亡,解剖表明:羊的肺部和腎臟等器官有異常。其它克隆公羊經(jīng)過與嶗山種母羊交配,得到轉(zhuǎn)基因后代,其中兩個原代轉(zhuǎn)基因羊的后代母羊已成熟、所獲得的奶經(jīng)蛋白質(zhì)電泳證明:轉(zhuǎn)基因克隆羊后代奶中含有約60 kD大小的rhATⅢ糖蛋白;經(jīng)Elisa檢測表明:在奶中含有大量活性的rhATⅢ,在來源于兩個不同克隆公羊的后代母羊奶中的rhATⅢ含量分別為0.4mg/L和3 g/L。此研究證明:轉(zhuǎn)基因奶山羊可以大量地生產(chǎn)具有很高活性的rhATⅢ。用這種方法生產(chǎn)的rhATⅢ通過蛋白質(zhì)提純,制成注射針劑,將可用于人的抗凝血酶Ⅲ缺乏癥的治療、預(yù)防血栓和重大手術(shù)過程中的止血的作用等。
【作者單位】:
【關(guān)鍵詞】:
【基金】:
青島市科技局科技發(fā)展計劃資助(No.2001KNS-2N-29)~~
【分類號】:Q789
【正文快照】:
抗凝血酶m(ATm)在人體中主要由肝臟合成,,是存在于血漿中的一種重要的抗凝血因子,它是抗凝血酶活性的主要承擔(dān)者(60%一70%),同時也是血漿中存在的重要的絲氨酸蛋白酶抑制劑。其主要功能是滅活凝血酶,如與凝血酶Xa及Xla結(jié)合;并且在維持血液生理性凝血與抗凝血平衡中起著重
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本文編號:220433
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