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基于PCR和蛋白檢測(cè)分析多基因轉(zhuǎn)化甘蔗的遺傳穩(wěn)定性

發(fā)布時(shí)間:2018-07-25 14:07
【摘要】:甘蔗是重要的糖料作物,也是重要的能源作物。由于復(fù)雜的遺傳背景、較低的可育性和缺乏優(yōu)異種質(zhì)資源等因素給甘蔗品種改良帶來了很大的困難,通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)為甘蔗品種改良提供了有效的途徑。而轉(zhuǎn)基因植物的遺傳穩(wěn)定性是植物轉(zhuǎn)基因育種過程中一項(xiàng)重要的研究課題。本研究通過一次多基因遺傳轉(zhuǎn)化,同時(shí)將四個(gè)目的基因?qū)敫收崞贩N新臺(tái)糖22號(hào)中。通過PCR檢測(cè),對(duì)轉(zhuǎn)基因甘蔗T_0、T_1和T_2代的遺傳穩(wěn)定性進(jìn)行分析;通過外源蛋白快速試紙條檢測(cè),對(duì)轉(zhuǎn)基因植株四個(gè)外源基因中的基因(bar抗除草劑基因和cry1Ab抗蟲基因)蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。證明一次四基因遺傳轉(zhuǎn)化的甘蔗轉(zhuǎn)基因株系,在T_0代出現(xiàn)了部分基因丟失的現(xiàn)象,且T_0代甘蔗的主莖和分蘗可能為不同的轉(zhuǎn)基因事件。但如果是四個(gè)基因均能完整整合到基因組中的株系,則四個(gè)基因可以在T_0、T_1和T_2代中得到穩(wěn)定遺傳,也可以穩(wěn)定的檢測(cè)得到外源基因蛋白的表達(dá)。
[Abstract]:Sugarcane is an important sugar crop as well as an important energy crop. Because of the complex genetic background, low fertility and lack of excellent germplasm resources, it is very difficult to improve sugarcane varieties. Transgenic technology provides an effective way for sugarcane variety improvement. Genetic stability of transgenic plants is an important research topic in the process of plant transgenic breeding. In this study, four target genes were introduced into sugarcane variety Xintaotang 22 by a polygenic genetic transformation. The genetic stability of transgenic sugarcane T _ 0 / T _ 1 and T _ s _ 2 generations was analyzed by PCR, and the foreign protein rapid test strip was used to detect the genetic stability of the transgenic sugarcane. The protein expression of four foreign genes (bar herbicide resistant gene and cry1Ab insect-resistant gene) were detected. It was proved that partial gene loss occurred in the first generation of transgenic sugarcane lines transformed by four genes, and the main stem and tiller of sugarcane in T _ S _ 0 generation might be different transgenic events. However, if the four genes can be integrated into the genome completely, the four genes can be stably inherited in the two generations of T _ (0) T _ (1) and T _ (th), and the expression of exogenous gene proteins can also be detected stably.
【作者單位】: 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究中心中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所農(nóng)業(yè)部熱帶作物生物學(xué)與遺傳資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】:海南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(20163122) 國(guó)家自然科學(xué)基金課題(31371687)共同資助
【分類號(hào)】:Q943.2;S566.1

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本文編號(hào):2144057

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