褶牡蠣金屬硫蛋白基因的克隆及組織表達(dá)分析
本文選題:褶牡蠣 + 金屬硫蛋白; 參考:《水產(chǎn)科學(xué)》2017年05期
【摘要】:金屬硫蛋白是一類廣泛存在于生物體中的低分子質(zhì)量、富含半胱氨酸、高度誘導(dǎo)性的內(nèi)源金屬結(jié)合蛋白。采用RACE技術(shù),首次獲得了褶牡蠣金屬硫蛋白基因的全長cDNA序列。該序列全長500bp,由長54bp的5′非翻譯區(qū),122bp的3′非翻譯區(qū)和324bp的開放閱讀框組成,共編碼107個氨基酸。該蛋白序列中半胱氨酸含量豐富(28%),不含芳香族氨基酸,富含金屬硫蛋白典型的Cys-X(1-3)-Cys結(jié)構(gòu),存在軟體動物等無脊椎動物金屬硫蛋白特征序列,是金屬硫蛋白家族成員。熒光定量PCR法,測定褶牡蠣體內(nèi)3種組織(內(nèi)臟團(tuán)、鰓、外套膜)中金屬硫蛋白mRNA組織特異性表達(dá)以及重金屬(Cd~(2+)、Zn~(2+))慢毒脅迫效應(yīng)。結(jié)果表明,金屬硫蛋白mRNA在褶牡蠣內(nèi)臟團(tuán)中相對表達(dá)量最高;褶牡蠣內(nèi)臟團(tuán)金屬硫蛋白mRNA表達(dá)量與重金屬脅迫時間呈現(xiàn)出一定時間效應(yīng)關(guān)系,從脅迫開始至7d表現(xiàn)為正調(diào),而7~10d開始為負(fù)調(diào),Cd~(2+)脅迫和Zn~(2+)聯(lián)合Cd~(2+)脅迫下金屬硫蛋白mRNA表達(dá)量顯著增加,最大表達(dá)量為對照組的42.5倍(Cd),Zn~(2+)聯(lián)合Cd~(2+)脅迫表現(xiàn)為拮抗作用。本試驗(yàn)結(jié)果為生產(chǎn)實(shí)踐上在多種重金屬污染下應(yīng)用金屬硫蛋白作為生物標(biāo)志物監(jiān)測水域污染狀況,保護(hù)水生生態(tài)環(huán)境提供了依據(jù)。
[Abstract]:Metallothionein is a class of low molecular weight, cysteine-rich and highly inducible endogenous metal-binding proteins widely found in organisms. The full-length cDNA sequence of metallothionein gene was obtained by race for the first time. The 5'untranslated region (5'untranslated region) of 54bp and the open reading frame (ORAF) of 324bp are composed of 5'untranslated region (5'untranslated region) of 54bp and an open reading frame (ORAF) of 324bp, encoding 107 amino acids. The protein sequence is rich in cysteine content (28%), does not contain aromatic amino acids, and is rich in metallothionein typical Cys-X (1-3) -Cys structure. It has the characteristic sequence of metallothionein in invertebrates such as molluscs, and is a member of metallothionein family. The specific expression of metallothionein mRNA in three tissues (visceral mass, Gill and outer membrane) and the slow toxicity of heavy metal (Cd2) Zn2 in oyster were determined by fluorescence quantitative polymerase chain reaction (FQ-PCR). The results showed that the relative expression of metallothionein mRNA was the highest in the visceral mass of oyster, and the expression of metallothionein mRNA in the visceral mass of oyster showed a time-dependent relationship with the time of heavy metal stress, which was positive from the beginning of stress to 7 days. The expression of metallothionein mRNA was significantly increased under the stress of Zn ~ (2) and CD ~ (2) + CD ~ (2). The maximum expression of metallothionein mRNA was 42.5 times (CD) ~ (2) ~ (2) + CD ~ (2) + CD ~ (2) stress. The results provided a basis for the application of metallothionein as a biomarker to monitor the water pollution and protect the aquatic ecological environment in the production practice under the pollution of many heavy metals.
【作者單位】: 國家海洋局第三海洋研究所;廈門大學(xué);國家海洋局海洋生物資源綜合利用工程技術(shù)研究中心;
【基金】:廈門海洋研究開發(fā)院共建項目(K150104) 國家海洋局第三海洋研究所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項資金資助項目(海三科2013014)
【分類號】:S917.4;X834
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本文編號:2057946
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