本文選題：多裂葉荊芥(Nepeta + multifida)�。� 參考：《河北大學》2017年碩士論文

【摘要】：對羥基苯基丙酮酸雙加氧酶(ρ-hydroxyphenylpyruvate dioxigenase,HPPD,EC1.13.11.27)是20世紀90年代確定的除草劑靶標酶,在植物體內它可參與生育酚和質體醌的生物合成。Cjhppd是從對除草劑DTP具有抗性的黃連(Coptics japonica)小檗堿高產(chǎn)細胞系中克隆出來的編碼黃連HPPD的基因,本試驗旨在將Cjhppd基因導入多裂葉荊芥并獲得轉基因植株,以研究Cjhppd對轉基因植物抗性性狀改良的作用。為建立根癌農(nóng)桿菌介導的多裂葉荊芥轉化體系,以攜帶pBI121-gfp質粒的根癌農(nóng)桿菌LBA4404菌株介導,荊芥試管苗帶葉腋莖段為轉化受體材料,探究了預培養(yǎng)時間、菌液濃度、侵染時間、共培養(yǎng)時間4個因素對荊芥轉化效果的影響。每個因素設置4個水平,以L16(45)正交實驗進行,每個實驗重復3次。篩選的卡那霉素抗性芽以及植株進行gfp熒光檢測和PCR、RT-PCR分子檢測。按照上述優(yōu)化的轉化條件,以攜帶pGWB2-Cjhppd植物表達載體的根癌農(nóng)桿菌LBA4404菌株介導多裂葉荊芥的Cjhppd基因轉化,得到轉Cjhppd多裂葉荊芥植株。對轉Cjhppd荊芥植株進行PCR、RT-PCR分子檢測;用含有不同濃度的DTP和NaCl的Hoagland營養(yǎng)液或MS培養(yǎng)基對多裂葉荊芥轉化植株進行脅迫處理,分析轉基因植株的除草劑抗性和耐鹽性。主要結果如下:1.gfp基因導入轉化多裂葉荊芥,并在根莖葉花中表達;轉化植株的根中gfp基因表達量最多;其次是莖和葉中,且兩者表達量差別不大;花中最少;預培養(yǎng)5 d、菌液濃度為0.7、侵染15 min、共培養(yǎng)3 d為多裂葉荊芥的最優(yōu)轉化條件。轉化率為20%,每個外植體再生抗性不定芽數(shù)平均為5個;抗性芽生根培養(yǎng)30 d后得到轉化植株,生根率為60%。荊芥轉化體系的建立為利用植物基因工程改良其遺傳性狀奠定基礎。2.篩選培養(yǎng)30 d后,將轉Cjhppd卡那霉素抗性芽生根培養(yǎng)1個月后,得到卡那霉素抗性植株;轉化率為22%,每個外植體再生抗性不定芽數(shù)平均為5個;轉化芽在生根培養(yǎng)基培養(yǎng)12 d后生出第一條根,生根率為66%。3.提取DNA進行PCR檢測表明Cjhppd基因整合到多裂葉荊芥基因組上。待轉化荊芥植株長到株高5-6 cm將其移栽。經(jīng)過一個月得到移栽苗,移栽成活率為60%。提取RNA進行RT-PCR檢測表明Cjhppd基因在根、莖、葉中都有表達。從轉錄水平上說明Cjhppd在轉基因荊芥基因組中表達。4.對轉Cjhppd荊芥植株葉片進行除草劑抗性檢測,結果表明:相同DTP濃度下,轉化植株白化程度明顯弱于野生植株。初步認為,轉Cjhppd荊芥對除草劑DTP表現(xiàn)出一定的抗性。5.對轉Cjhppd荊芥植株進行鹽脅迫處理,轉化荊芥在NaCl濃度為150 mmol/L時可以健康的生長,在200 mmol/L為時出現(xiàn)萎蔫;而野生型荊芥植株在50 mmol/L時就出現(xiàn)葉片發(fā)黃萎蔫的現(xiàn)象。6.對耐鹽性指標測定結果表明:經(jīng)過不同濃度鹽脅迫后,野生型和轉化荊芥植株的脯氨酸含量、POD活性、MDA含量、CAT活性都呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,轉化植株的指標上升值明顯低于野生型。野生型植株葉綠素和類胡蘿卜素含量下降;轉化植株3種光合色素含量先上升后下降,而且在同一鹽濃度下含量高于野生型。鹽對類胡蘿卜素含量影響較大。初步說明轉化植株對鹽脅迫表現(xiàn)出了一定的抗性,耐受濃度為150mmol/L。類胡蘿卜素可能與提高轉化植株耐鹽性相關。
[Abstract]:The transgenic plants were transformed with Agrobacterium tumefaciens LBA4404 containing different concentrations of DTP and NaCl . The results showed that the content of proline , POD activity , MDA content and CAT activity of transgenic plants showed that the content of proline , POD activity , MDA content and CAT activity of transgenic plants were higher than those of wild plants .
【學位授予單位】：河北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：Q943.2

【參考文獻】

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本文編號：2030955