本文選題：噬菌體 + 高通量測序�。� 參考：《中國抗生素雜志》2017年10期

【摘要】：噬菌體是解決致病菌多重耐藥性問題的最佳選擇之一,然而噬菌體的宿主特異性使得噬菌體的裂解譜有限,因此研究噬菌體宿主特異性對于噬菌體治療應(yīng)用具有重要意義。本研究通過篩選大腸埃希菌宿主菌BL21噬菌體IME253的耐受菌,結(jié)合對敏感菌和耐受菌的高通量測序,分析基因組差異,預(yù)測噬菌體耐受相關(guān)基因,發(fā)現(xiàn)耐受與外膜受體蛋白FepA有關(guān)。然后利用向?qū)RISPR/Cas9切開敏感菌fepA基因,同時利用Red同源重組系統(tǒng)無痕敲除fepA基因,證明fepA基因敲除可以導(dǎo)致細菌BL21對噬菌體IME253耐受。本實驗利用比較基因組學分析平臺,建立了一種宿主耐受噬菌體的分析方法,并且利用CRIPSR無痕敲除技術(shù)來驗證耐受相關(guān)基因,為噬菌體治療提供理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:Bacteriophage is one of the best choice to solve the problem of multidrug resistance of pathogenic bacteria. However, the host specificity of bacteriophage makes the cleavage spectrum of phage limited, so it is important to study the specificity of phage host for the application of bacteriophage therapy. In this study, we screened the resistant bacteria of Escherichia coli BL21 phage IME253, combined with the high-throughput sequencing of sensitive bacteria and tolerant bacteria, analyzed the genomic differences, predicted the genes related to phage tolerance, and found that tolerance was related to the outer membrane receptor protein FepA. Then the fepA gene was cut open by CRISPRP / Cas9 and the fepA gene was knocked out by the Red homologous recombination system. It was proved that fepA gene knockout could induce the bacterial BL21 tolerance to the bacteriophage IME253. In this study, a host tolerance phage analysis method was established by using comparative genomics analysis platform, and CRIPSR marker free knockout technique was used to verify tolerance related genes, which provided a theoretical basis for phage therapy.
【作者單位】： 河北師范大學生命科學院;青島農(nóng)業(yè)大學動物科技學院;軍事醫(yī)學科學院微生物流行病研究所病原微生物生物安全國家重點實驗室;
【基金】：科技重大專項“十二五”實施計劃項目(No.2013ZX10004-605、No.2013ZX10004-217、No.2013ZX10004-607、No.2011ZX10004-001) 國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃項目(863計劃)(No.2014AA021402和No.2012AA022-003) 國家自然科學基金項目(No.81572045)
【分類號】：Q933

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本文編號：2024505