本文選題：BEX2 + 結直腸癌��； 參考：《浙江大學》2016年博士論文

【摘要】：研究目的Bex2(Brain expressed X-linked protein 2)蛋白屬于IDPs(Instrinsically Disordered Proteins),包含128個氨基酸,在細胞的轉錄調(diào)節(jié)、周期、增殖等信號通路中發(fā)揮著重要作用。近年來,有研究報道BEX2與腫瘤發(fā)生有密切關系,且在不同類型的腫瘤中發(fā)揮不同的功能。目前BEX2在結直腸癌組織中的功能如何尚未見報道。深入探討B(tài)EX2在結直腸癌中的功能和機制不僅可進一步探究結直腸癌發(fā)生發(fā)展中遺傳學特征,也可為治療結直腸癌提供新的靶點。研究內(nèi)容和方法本課題從公共數(shù)據(jù)庫GEO (Gene Expression Omnibus)采集GSE14333數(shù)據(jù)庫中結直腸癌組織的BEX2的表達水平,分析其與結直腸癌臨床分期的相關性,并利用定量PCR檢測34例新鮮結直腸癌組織中的BEX2表達,驗證BEX2與臨床分期的關系。利用細胞增殖實驗、克隆形成實驗、細胞遷徙遷移實驗、動物致瘤能力實驗和動物體內(nèi)肝轉移模型驗證BEX2對結直腸癌細胞的影響。同時,結合生物信息學分析、蛋白免疫印跡實驗、基因芯片技術等探索BEX2的可能下游調(diào)控機制。研究結果我們第一次分析了BEX2表達水平與結直腸癌分期的關系,首次發(fā)現(xiàn)BEX2的表達與結直腸癌的TNM分期呈正相關。體內(nèi)外實驗證實BEX2敲除后能明顯抑制結直腸癌細胞增殖,克隆形成能力和致瘤能力。BEX2敲除后MAPK通路中的JNK和c-Jun的磷酸化表達減弱,而Erk及p-38未發(fā)生改變。而在非沉默BEX2細胞中加入JNK選擇性抑制劑SP600125后生長得到顯著抑制,且生長受抑制程度和BEX2敲除組類似；同時,我們發(fā)現(xiàn)BEX2敲除后能明顯抑制結直腸癌細胞發(fā)生遷移,盲腸原位肝轉移模型和半脾肝轉移模型結果均提示BEX2敲除后能顯著延長BEX2敲除組肝轉移模型老鼠的生存時間,且該過程是非EMT依賴的,高通量芯片比較BEX2敲除前后的基因差異,提示與MMP家族基因改變相關。研究結論與創(chuàng)新BEX2在不同類型的腫瘤中發(fā)揮不同的功能,而BEX2在結直腸癌中的研究尚未報道。深入探討B(tài)EX2在結直腸癌中的功能和機制研究有助于進一步明確結直腸癌發(fā)生發(fā)展的分子機制,從為基因治療提供了新的靶點。1.本文利用系統(tǒng)生物學分析提取了GEO數(shù)據(jù)庫中數(shù)據(jù),并用大量結直腸癌新鮮組織樣本中驗證了BEX2表達水平和結直腸癌臨床病理特征,第一次發(fā)現(xiàn)BEX2的表達水平與結直腸癌TNM分期呈明顯正相關。2.本文構建了BEX2基因敲除細胞系,第一次證明敲除BEX2后結直腸癌細胞增殖,克隆形成能力,動物致瘤能力明顯降低,主要通過MAPK/JNK信號通路來抑制結直癌細胞增殖。3.本研究為進一步研究BEX2在結直腸癌肝轉移中的作用提供基礎。我們成功建立了大腸癌盲腸原位及半脾肝轉移模型,發(fā)現(xiàn)BEX2敲除后抑制了結腸癌肝轉移發(fā)生,且該過程是EMT非依賴的,基因芯片數(shù)據(jù)提示可能與MMP系列基因改變相關。
[Abstract]:Objective Bex2(Brain expressed X-linked protein 2) is a member of IDPs(Instrinsically Disordered proteins, which contains 128 amino acids and plays an important role in cell transcriptional regulation, cell cycle, proliferation and other signaling pathways. In recent years, it has been reported that BEX2 is closely related to tumorigenesis and plays different functions in different types of tumors. At present, the function of BEX2 in colorectal cancer tissues has not been reported. Further study on the function and mechanism of BEX2 in colorectal cancer can not only further explore the genetic characteristics of colorectal cancer, but also provide a new target for the treatment of colorectal cancer. Methods the expression level of BEX2 in colorectal cancer tissue was collected from GEO gene Expression Omnibus database, and the correlation between BEX2 expression and clinical stage of colorectal cancer was analyzed. Quantitative PCR was used to detect the expression of BEX2 in 34 cases of fresh colorectal cancer, and to verify the relationship between BEX2 and clinical stage. The effects of BEX2 on colorectal cancer cells were tested by cell proliferation assay, clone formation test, migration and migration test, tumorigenic ability test and liver metastasis model in vivo. At the same time, the possible downstream regulation mechanism of BEX2 was explored by bioinformatics analysis, Western blot assay and gene chip technology. Results for the first time, we analyzed the relationship between the expression of BEX2 and the staging of colorectal cancer. For the first time, we found that the expression of BEX2 was positively correlated with the TNM stage of colorectal cancer. In vitro and in vivo experiments showed that BEX2 knockout could significantly inhibit the proliferation of colorectal cancer cells. The expression of JNK and c-Jun phosphorylation in MAPK pathway was decreased after knockout of BEX2 and clone formation ability. However, Erk and p-38 did not change. SP600125, a selective inhibitor of JNK, was significantly inhibited in non-silencing BEX2 cells, and the inhibition was similar to that in BEX2 knockout group. At the same time, we found that BEX2 knockout could significantly inhibit the migration of colorectal cancer cells. The results of cecum in situ liver metastasis model and hemisplenic liver metastasis model showed that BEX2 knockout could significantly prolong the survival time of BEX2 knockout mice, and the process was independent of EMT. The gene differences before and after BEX2 knockout were compared by high throughput microarray. The results suggest that it is related to the gene change of MMP family. Conclusion BEX2 plays different roles in different types of tumors, while BEX2 in colorectal cancer has not been reported. Further study on the function and mechanism of BEX2 in colorectal cancer is helpful to clarify the molecular mechanism of colorectal cancer and provide a new target for gene therapy. The data from GEO database were extracted by systematic biological analysis. The expression level of BEX2 and clinicopathological features of colorectal cancer were verified by a large number of fresh tissue samples. It was found for the first time that the expression of BEX2 was positively correlated with the TNM stage of colorectal cancer. BEX2 gene knockout cell line was constructed in this paper. It was first demonstrated that the proliferation, clone formation and tumorigenic ability of colorectal cancer cells after BEX2 knockout were significantly decreased, mainly through the MAPK/JNK signaling pathway to inhibit the proliferation of colorectal cancer cells. 3. This study provides a basis for further study of the role of BEX2 in liver metastasis of colorectal cancer. We successfully established an in situ and hemipplegic liver metastasis model of colorectal cancer. It was found that BEX2 knockout inhibited the occurrence of liver metastasis of colon cancer and the process was EMT independent. The gene chip data suggested that this process might be related to the MMP gene series.
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34

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本文編號：1977942