本文選題：干細胞 + Peinado積分法��； 參考：《天津醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的通過比較正常結腸粘膜、結腸腺瘤(包括管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、絨毛-管狀腺瘤)、腺瘤癌變及結腸癌組織中NF-kB受體激活子RANK及其配體RANKL的表達差異,從而探討RANK和RANKL在結腸上皮序列轉化中的作用及其與腫瘤干細胞的關系。方法采用免疫組織化學S-P法檢測結腸上皮序列轉化的不同階段病變中RANK和RANKL表達的差異,分析它們的臨床病理意義,探討兩因子結腸上皮序列的轉化過程中的作用。檢測結腸上皮序列轉化的不同階段病變中CD133、NF-kB的表達情況,同時進行CD31標記計數(shù)微血管密度(MVD),比較RANK及RANKL與CD133、CD31、NF-kB表達的相關性,分析CD133、NF-kB因子的表達情況,計數(shù)CD31標記的微血管密度(MVD),比較RANK和RANKL與CD133、CD31、NF-kB表達的相關性以及RANK和RANKL的表達與腫瘤干細胞的關系。以40例正常結腸粘膜組織作為對照組,采用Peinado計數(shù)方法分析上述幾項指標在結腸上皮序列轉化的不同階段病變中的差別和它們之間的相互關系,所得數(shù)據(jù)經統(tǒng)計學分析并結合隨訪情況進行評價。結果1.臨床病例資料回顧本研究共收集2012年~2014年天津醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院存檔的結腸腺瘤、腺瘤癌變和結腸癌標本120例以及正常結腸粘膜40例。以上樣本均是具有完整的臨床病理資料和隨訪資料,所有標本的患者術前都沒有接受放療或化療治療。且明確存檔的石蠟包埋組織標本,所有標都采用中性福爾馬林固定,經正規(guī)石蠟包埋并切片。并由兩位具有豐富經驗和資質的病理診斷醫(yī)師按照WHO的《病理組織學分類》復習病理切片對其進行證實。2.在結腸上皮序列轉化的不同病變階段中RANK和RANKL的表達與臨床病理意義2.1 RANK在結腸上皮序列轉化的不同病變階段中的表達與臨床病理意義RANK的陽性表達產物呈棕黃色,主要表達于結腸癌細胞的細胞膜和細胞漿,呈彌漫性分布。在正常粘膜、結腸腺瘤、腺瘤癌變和結腸癌中RANK的陽性率表達分別為0(0/40)、7.5%(3/40)、70.0%(28/40)和87.5%(35/40),此結果提示RANK在腺瘤癌變及結腸癌組織中的表達明顯高于正常粘膜組和結腸腺瘤組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),并且在正常結腸粘膜→結腸腺瘤→腺瘤癌變→結腸腺癌這一序列轉化過程中RANK的表達呈逐漸增高趨勢,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在結腸上皮病變轉化序列的不同階段中,RANK與腫瘤的組織學分級和大小密切相關(χ2=152.395,P0.01;χ2=61.403,P0.05)。腫瘤級別越高,RANK的陽性表達越強;腫瘤體積越大,RANK的陽性表達越強。RANK的陽性表達與性別和年齡無關(χ2=3.218,P0.05;χ2=2.114,P0.05)。2.2 RANKL在結腸上皮序列轉化的不同病變階段中的表達與臨床病理意義RANKL的陽性表達產物呈棕黃色,主要表達于結腸癌細胞的細胞膜和細胞漿,呈彌漫性分布。在正常粘膜、結腸腺瘤、腺瘤癌變和結腸癌中RANKL的陽性表達率分別為0(0/40)、10.0%(4/40)、67.5%(27/40)和85.0%(34/40),此結果提示RANKL在腺瘤癌變及結腸癌組織中的表達明顯高于正常粘膜組和結腸腺瘤組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),并且在正常結腸粘膜→結腸腺瘤→腺瘤癌變→結腸腺癌這一序列轉化過程中RANKL的表達呈逐漸增高趨勢,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。RANKL與腫瘤的組織學分級和大小密切相關(χ2=147.436,P0.01;χ2=61.413,P0.05)。腫瘤級別越高,RANKL的陽性表達越強;腫瘤體積越大,RANKL的陽性表達越強。RANKL的陽性表達與性別和年齡無關(χ2=3.219,P0.05;χ2=2.121,P0.05)。3.在結腸上皮序列轉化的不同病變階段中CD133、NF-k B、CD31的表達與臨床病理意義3.1 CD133在結腸上皮序列轉化的不同病變階段中的表達與臨床病理意義CD133的陽性細胞產物呈棕黃色,主要定位于結腸上皮細胞的細胞膜和細胞漿,呈彌漫性分布。在正常粘膜、結腸腺瘤、腺瘤癌變和結腸癌中CD133的陽性細胞率分別為10.0%(4/40)、15.0%(6/40)、47.5%(19/40)和57.5%(23/40)。此結果提示CD133在腺瘤癌變及結腸癌組織中的陽性細胞明顯多于正常粘膜組和腺瘤組,其差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),并且在正常結腸粘膜→結腸腺瘤→腺瘤癌變→結腸腺癌這一序列轉化過程中CD133的陽性細胞呈逐漸增高趨勢,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在結腸上皮轉化序列的不同病變階段中,CD133與腫瘤的組織學分級和大小密切相關(χ2=148.884,P0.01;χ2=57.472,P0.05)。腫瘤級別越高,CD133的陽性細胞越多;腫瘤體積越大,CD133的陽性細胞越多。CD133的陽性細胞的多少與性別和年齡無關(χ2=3.473,P0.05;χ2=2.238,P0.05)。3.2 NF-kB在結腸上皮序列轉化的不同病變階段中的表達與臨床病理意義NF-kB的陽性表達產物呈棕黃色,主要定位于結腸上皮細胞的細胞膜和細胞漿,呈彌漫性分布。在正常粘膜、結腸腺瘤、腺瘤癌變和結腸癌中NF-kB的陽性表達率分別為10.0%(4/40)、12.5%(5/40)、50.0%(20/40)和55.0%(22/40)。此結果提示NF-kB在腺瘤癌變及結腸癌組織中的表達明顯高于正常粘膜組和結腸腺瘤組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),并且在正常結腸粘膜→結腸腺瘤→腺瘤癌變→結腸腺癌這一序列轉化過程中NF-kB的表達呈逐漸增高趨勢,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在結腸上皮轉化序列的不同病變階段中,NF-kB與腫瘤的組織學分級和大小密切相關(χ2=145.385,P0.01;χ2=57.472,P0.05)。腫瘤級別越高,NF-kB的陽性表達越強;腫瘤體積越大,NF-kB的陽性表達越強。NF-kB的陽性表達與性別和年齡無關(χ2=2.786,P0.05;χ2=2.524,P0.05)。3.3 CD31在結腸上皮序列轉化的不同病變階段中的表達與臨床病理意義CD31的陽性表達呈棕黃色,主要定位于血管內皮細胞,呈彌漫性分布。在正常粘膜、結腸腺瘤、腺瘤癌變和結腸癌中CD31標記的MVD計數(shù)分別為0.05±0.22、4.75±1.01、4.90±1.01和5.25±0.98。此結果提示MVD在結腸腺瘤組、腺瘤癌變及結腸癌組織中明顯高于正常粘膜組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),并且在正常結腸粘膜→結腸腺瘤→腺瘤癌變→結腸腺癌這一序列轉化過程中MVD呈逐漸增高趨勢,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在結腸上皮轉化序列的不同病變階段中,MVD與腫瘤的組織學分級和大小密切相關(χ2=87.436,P0.01;χ2=66.563,P0.05)。腫瘤級別越高,MVD逐漸增高;腫瘤體積越大,MVD越高。MVD的高低與性別和年齡無關(χ2=3.473,P0.05;χ2=2.238,P0.05)。4.在結腸上皮序列轉化的不同病變階段中RANK、RANKL、CD133、和NF-kB之間的相關性4.1 RANK與RANKL在結腸上皮病變轉化序列中表達的相關性通過Spearman等級相關分析,RANK與RANKL的表達在整個結腸上皮序列轉化過程中呈正相關(rs=0.652,P0.01),其中在正常結腸粘膜組織中RANK與RANKL的表達無明顯相關性(P0.05),而在結腸腺瘤組織、腺瘤癌變組織和結腸癌組織中RANK與RANKL的表達呈正相關(rs=0.389,P0.05;rs=0.568,P0.05;rs=0.716,P0.01)。4.2 RANK與CD133在結腸上皮病變轉化序列中表達的相關性通過Spearman等級相關分析,RANK與CD133的表達在整個結腸上皮序列轉化過程中呈正相關(rs=0.838,P0.01),其中在正常結腸粘膜組織中RANK與CD133的表達無明顯相關性(P0.05),而在結腸腺瘤組織、腺瘤癌變組織和結腸癌組織中RANK與CD133的表達呈正相關(rs=0.479,P0.05;rs=0.350,P0.05;rs=0.605,P0.01)。4.3 CD133與RANKL在結腸上皮病變轉化序列中表達的相關性通過Spearman等級相關分析,RANKL與CD133的表達在整個結腸上皮序列轉化過程中呈正相關(rs=0.863,P0.01),其中在正常結腸粘膜組織中RANKL與CD133的表達無明顯相關性(P0.05),而在結腸腺瘤組織、腺瘤癌變組織和結腸癌組織中RANKL與CD133的表達呈正相關(rs=0.448,P0.05;rs=0.329,P0.05;rs=0.588,P0.01)。4.4 CD133與NF-kB在結腸上皮病變轉化序列中表達的相關性通過Spearman等級相關分析,CD133與NF-kB的表達在整個結腸上皮序列轉化過程中呈正相關(rs=0.497,P0.01),其中在正常結腸粘膜組織中CD133與NF-kB的表達無明顯相關性(P0.05),而在結腸腺瘤組織、腺瘤癌變組織和結腸癌組織中CD133與NF-kB的表達呈正相關(rs=0.382,P0.05;rs=0.324,P0.05;rs=0.537,P0.01)。4.5 RANK與NF-kB在結腸上皮病變轉化序列中表達的相關性通過Spearman等級相關分析,RANK與NF-kB的表達在整個結腸上皮序列轉化過程中呈正相關(rs=0.529,P0.01),其中在正常結腸粘膜組織中RANK與NF-kB的表達無明顯相關性(P0.05),而在結腸腺瘤組織、腺瘤癌變組織和結腸癌組織中RANK與NF-kB的表達呈正相關(rs=0.412,P0.05;rs=0.341,P0.05;rs=0.599,P0.01)。此結果提示,RANK基因的異常表達與NF-kB上調在整個結腸上皮序列轉化的發(fā)展過程中可能發(fā)揮了一定的作用,RANK基因的異常表達可能參與了調控NF-kB信號轉導通路的整個過程。4.6 RANKL與NF-kB在結腸上皮病變轉化序列中表達的相關性通過Spearman等級相關分析,RANKL與NF-kB的表達在整個結腸上皮序列轉化過程中呈正相關(rs=0.518,P0.01),其中在正常結腸粘膜組織中RANKL與NF-kB的表達無明顯相關性(P0.05),而在結腸腺瘤組織、腺瘤癌變組織和結腸癌組織中RANKL與NF-kB的表達呈正相關(rs=0.408,P0.05;rs=0.323,P0.05;rs=0.590,P0.01)。此結果提示,RANKL的異常表達與NF-kB上調在整個結腸上皮序列轉化的發(fā)展過程中可能發(fā)揮了一定的作用,RANKL基因的異常表達同樣也可能參與了調控NF-kB信號轉導通路的整個過程。結論1.RANK基因及其配體表達的上調在整個結腸上皮序列轉化的發(fā)展過程中可能發(fā)揮了一定的作用,RANK基因及其配體的異常表達可能參與了結腸癌的發(fā)生發(fā)展,并通過促進侵襲參與了腫瘤的演變。2.在整個結腸上皮序列轉化過程中,CD133陽性細胞的數(shù)量與RANK基因及其配體的陽性表達呈正相關性,即在正常結腸粘膜→結腸腺瘤→腺瘤癌變→結腸腺癌這一序列轉化過程中,隨著CD133陽性細胞的增多,RANK基因及其配體的陽性表達也增加。提示RANK基因及其配體介導的NF-kB信號轉導通路可以激活bcl-2的抗凋亡基因,在結腸腺瘤→腺瘤癌變→結腸癌的轉化中抑制腫瘤細胞的凋亡,并且促進了結腸上皮細胞的惡性轉化,從而使各因子的陽性表達明顯增加;同時,NF-kB信號轉導通路通過在基因及蛋白表達兩個水平上調控C-IAP的表達,抑制Caspase-8的活化,阻止腫瘤細胞凋亡的發(fā)生。此外,NF-kB可通過間接誘導生存因子或直接激活細胞周期蛋白D1的轉錄來促進細胞G1/S期的進程,從而促進腫瘤細胞的增殖。提示RANK基因及其配體RANKL的表達在結腸上皮轉化序列中對結腸上皮腫瘤細胞可能具有特異性,可通過活化NF-kB信號通路從而抑制結腸上皮腫瘤細胞的凋亡,誘導并促進結腸腫瘤的發(fā)生。因此,RANK基因及其配體介導的NF-kB信號轉導通路的異�？赡転榻Y腸癌細胞惡性表型的明顯特征之一,并可能為結腸癌形成過程中的早期事件。3.CD133陽性細胞、NF-kB及MVD在結腸上皮序列轉化過程的不同病變階段中依次升高,并且在整個結腸上皮序列轉化過程中,RANK和RANKL的表達分別與CD133陽性細胞、NF-kB呈正相關。此結果提示RANK基因及其配體的異常表達與CD133陽性細胞、NF-kB上調在整個結腸上皮序列轉化的發(fā)展過程中可能發(fā)揮了一定的作用,RANK基因及其配體的異常表達可能通過參與調控NF-kB信號轉導通路抑制腫瘤干細胞的凋亡,進而使腫瘤發(fā)生侵襲。4.對RANK基因及其配體進行觀察研究可能成為結腸癌發(fā)生機制探討、高危病例篩選及估測預后的一種新的途徑。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.3

【參考文獻】

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本文編號：1903578