本文選題：擬南芥 + 氰丙氨酸合酶��； 參考：《江蘇農(nóng)業(yè)學報》2017年06期

【摘要】：已有研究結(jié)果表明,植物自身能產(chǎn)生劇毒的氰化物(如HCN),而氰丙氨酸合酶(Cyanoalanine synthase,CAS)是植物解氰作用的關(guān)鍵酶,在植物生長、發(fā)育及逆境脅迫響應(yīng)過程中起重要作用。本研究通過克隆擬南芥CAS合酶關(guān)鍵基因CYS-C1全長后,構(gòu)建原核表達載體p EASY-CYS-C1并導入大腸桿菌E.coli受體細胞中進行表達。結(jié)果表明,在大腸桿菌E.coli細胞中成功誘導出可溶性的CYS-C1蛋白,其中IPTG最佳誘導時間為4 h,最佳誘導濃度為0.2 mmol/L。原核表達的CYS-C1蛋白經(jīng)Ni柱純化并免疫新西蘭白兔制備多克隆抗體,Western blot檢測結(jié)果表明,CYS-C1蛋白多克隆抗體的特異性較好。本試驗結(jié)果對于進一步開展CAS合酶的功能研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:It has been shown that plants can produce highly toxic cyanide, such as HCNN, and cyanoalanine synthase (cyanoalanine synthase) is the key enzyme of cyanolysis, which plays an important role in plant growth, development and stress response. After cloning the full length of Arabidopsis CAS synthase key gene CYS-C1, a prokaryotic expression vector, p EASY-CYS-C1, was constructed and expressed in Escherichia coli E.coli receptor cells. The results showed that soluble CYS-C1 protein was successfully induced in Escherichia coli E.coli cells. The optimal induction time and concentration of IPTG were 4 h and 0.2 mmol / L, respectively. CYS-C1 protein expressed in prokaryotic cells was purified by Ni column and immunized with New Zealand white rabbit to prepare polyclonal antibody. The results showed that the specificity of polyclonal antibody against CYS-C1 protein was better. The results laid a foundation for further research on the function of CAS synthase.
【作者單位】： 武漢生物工程學院生命科學與技術(shù)學院;武漢生物工程學院應(yīng)用生物技術(shù)研究中心;
【基金】：國家自然科學基金項目(31400242)
【分類號】：Q943.2

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