本文選題：Nectin + 巢氏PCR��； 參考：《中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)》2016年01期

【摘要】：采用巢式PCR方法獲得未見(jiàn)報(bào)道的綿羊Nectin4基因。根據(jù)GenBank上登錄的牛的Nectin4mRNA序列信息設(shè)計(jì)并合成10對(duì)引物;從綿羊肺支氣管組織中提取總RNA,采用隨機(jī)引物和Oligo(dT)將其反轉(zhuǎn)錄為cDNA;利用巢式PCR原理和PCR引物錯(cuò)配導(dǎo)致非特異反應(yīng)的特點(diǎn),改變常規(guī)PCR反應(yīng)條件,將10對(duì)引物分為2組,通過(guò)兩輪PCR即獲得大小片段相符的片段;TA克隆后測(cè)序證實(shí)已成功獲得綿羊Nectin4基因的完整ORF,證明本方法可作為一種獲取未知基因的方法,較RACE等其他傳統(tǒng)技術(shù)有明顯優(yōu)勢(shì);構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pCMV-Myc-Nectin 4,在CHO細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中獲得高效表達(dá),經(jīng)Western-blot分析,表達(dá)的Nectin 4蛋白的大小與預(yù)期符合。綿羊Nectin4基因的成功擴(kuò)增為后續(xù)對(duì)其在病毒入侵中的功能進(jìn)行研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Sheep Nectin4 gene was obtained by nested PCR method. Ten pairs of primers were designed and synthesized according to the information of Nectin4mRNA sequence of cattle registered on GenBank; total RNAs were extracted from sheep lung bronchi tissue and reversely transcribed into cDNAusing random primers and OligodT.The nested PCR principle and the characteristics of PCR primer mismatch led to nonspecific reactions. Ten pairs of primers were divided into 2 groups by changing the conventional PCR reaction conditions. The complete ORF of sheep Nectin4 gene has been obtained successfully by two rounds of PCR sequencing. It is proved that this method can be used as a method to obtain unknown genes, which has obvious advantages over other traditional techniques such as RACE. The recombinant expression plasmid pCMV-Myc-Nectin _ 4 was constructed and highly expressed in the cytoplasm of CHO cells. The size of the expressed Nectin _ 4 protein was in accordance with the expectation by Western-blot analysis. The successful amplification of sheep Nectin4 gene laid a foundation for further study on its function in virus invasion.
【作者單位】： 河南科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室甘肅省動(dòng)物寄生蟲(chóng)病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS-40-10) 公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目(201103008) 河南省高等學(xué)校重點(diǎn)科研項(xiàng)目(15A230002)
【分類號(hào)】：S826;S852.65

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1872095