本文選題：微小RNA + 丙酮酸脫氫酶激酶-　； 參考：《腫瘤防治研究》2016年05期

【摘要】：目的探討人結(jié)腸癌SW620細(xì)胞中miR-138和PDK1基因的表達(dá),闡明miR-138對(duì)PDK1基因的靶向調(diào)控作用以及對(duì)SW620細(xì)胞侵襲性的影響。方法培養(yǎng)SW620細(xì)胞并應(yīng)用免疫熒光檢測(cè)PDK1基因在細(xì)胞中的表達(dá)。采用生物信息學(xué)方法對(duì)miR-138和PDK1基因的靶向匹配關(guān)系進(jìn)行預(yù)測(cè)并應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)鑒定。脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染miR-138模擬物后,qRT-PCR檢測(cè)miR-138和PDK1基因的表達(dá),Western blot檢測(cè)PDK1蛋白的表達(dá),Transwell小室檢測(cè)SW620細(xì)胞體外的侵襲性。結(jié)果倒置相差顯微鏡下可見(jiàn)人結(jié)腸癌SW620細(xì)胞均勻分布,形態(tài)規(guī)則均一;細(xì)胞免疫熒光顯示細(xì)胞內(nèi)有PDK1蛋白的表達(dá),顯示紅色熒光。靶基因預(yù)測(cè)軟件miRanda和Target Scan顯示miR-138和PDK1基因匹配良好,雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)鑒定發(fā)現(xiàn)miR-138能夠結(jié)合PDK1 m RNA 3’UTR并有效抑制其表達(dá)。qRTPCR和Western blot檢測(cè)結(jié)果表明過(guò)表達(dá)miR-138能夠?qū)е翽DK1基因表達(dá)的下降。Transwell實(shí)驗(yàn)表明miR-138的過(guò)表達(dá)能夠抑制SW620細(xì)胞的侵襲。結(jié)論 miR-138通過(guò)靶向作用于PDK1 m RNA 3’UTR能夠負(fù)性調(diào)控PDK1基因的表達(dá),并能夠抑制人結(jié)腸癌SW620細(xì)胞的侵襲。
[Abstract]:Objective to investigate the expression of miR-138 and PDK1 genes in human colon cancer SW620 cells and to elucidate the targeted regulation of PDK1 gene by miR-138 and its effect on the invasion of SW620 cells. Methods SW620 cells were cultured and the expression of PDK1 gene was detected by immunofluorescence. The target matching relationship between miR-138 and PDK1 genes was predicted by bioinformatics and identified by double luciferase reporter gene system. After transfection of liposome 2000 into miR-138 mimics, the expression of miR-138 and PDK1 genes was detected by qRT-PCR and the expression of PDK1 protein was detected by Western blot. The invasiveness of SW620 cells in vitro was detected by transwell chamber. Results under inverted phase contrast microscope, the SW620 cells of human colon cancer were uniformly distributed, and the expression of PDK1 protein was detected by cell immunofluorescence, which showed red fluorescence. Target gene prediction software miRanda and Target Scan showed that miR-138 and PDK1 genes matched well. Identification of double luciferase reporter gene system found that miR-138 could bind to PDK1 m RNA 3'UTR and effectively inhibit its expression. QRT PCR and Western blot detection results showed that overexpression of miR-138 could lead to the decrease of PDK1 gene expression. Transwell experiment showed that miR-138 overexpression was over expressed. It can inhibit the invasion of SW620 cells. Conclusion miR-138 can negatively regulate the expression of PDK1 gene and inhibit the invasion of human colon cancer SW620 cells by targeting PDK1 m RNA 3'UTR.
【作者單位】： 遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院病理科;
【分類號(hào)】：R735.35

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本文編號(hào)：1843875