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紅花DHDPS基因全長(zhǎng)cDNA的克隆及植物表達(dá)載體構(gòu)建

發(fā)布時(shí)間:2018-05-03 06:21

  本文選題:紅花 + 二氫吡啶二羧酸合酶; 參考:《中草藥》2017年08期


【摘要】:目的克隆紅花賴氨酸生物合成途徑關(guān)鍵酶二氫吡啶二羧酸合酶(dihydrodipicolinate synthase DHDPS)基因的全長(zhǎng)c DNA序列,構(gòu)建植物超表達(dá)載體。方法根據(jù)紅花轉(zhuǎn)錄組文庫注釋信息獲得紅花DHDPS(CtDHDPS)基因的中間序列,通過RT-PCR與RACE技術(shù)從紅花種子中克隆CtDHDPS基因全長(zhǎng)c DNA序列。采用DNA重組技術(shù)構(gòu)建p BASTA-CtDHDPS植物超表達(dá)載體。結(jié)果分離CtDHDPS基因全長(zhǎng)1 309 bp,開放閱讀框954 bp,編碼317個(gè)氨基酸,編碼蛋白理論等電點(diǎn)為5.93,相對(duì)分子質(zhì)量約為34 750.79。通過DNA重組技術(shù)成功構(gòu)建了植物超表達(dá)載體p BASTA-CtDHDPS。結(jié)論獲得CtDHDPS基因全長(zhǎng)c DNA序列并成功構(gòu)建植物超表達(dá)載體,為闡明CtDHDPS基因的生物學(xué)功能及其在紅花賴氨酸生物合成途徑中作用機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。
[Abstract]:Objective to clone the full-length c DNA sequence of dihydrodipicolinate synthase synthase, a key enzyme in the biosynthesis pathway of safflower lysine, and to construct a plant overexpression vector. Methods according to the annotated information of Carthamus transcriptome library, the intermediate sequence of CtDHDPS gene was obtained, and the full-length c DNA sequence of CtDHDPS gene was cloned from the seeds of Carthamus safflower by RT-PCR and RACE techniques. The plant superexpression vector of p BASTA-CtDHDPS was constructed by DNA recombination technique. Results the total length of CtDHDPS gene was 1 309 BP, open reading frame 954 BP, encoding 317 amino acids, the theoretical isoelectric point of encoding protein was 5.93, and the relative molecular weight was about 34 750.79. The plant superexpression vector pBASTA-CtDHDPSS was successfully constructed by DNA recombination technique. Conclusion the full-length c DNA sequence of CtDHDPS gene was obtained and the plant overexpression vector was successfully constructed, which provides a scientific basis for elucidating the biological function of CtDHDPS gene and its mechanism in the biosynthesis pathway of lysine in safflower.
【作者單位】: 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院;吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生物反應(yīng)器與藥物開發(fā)教育部工程研究中心;吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)科技管理處;吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31401445) 吉林省教育廳“十三五”科學(xué)技術(shù)項(xiàng)目(JJKH20170310KJ) 吉林省科技廳醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)推進(jìn)計(jì)劃項(xiàng)目(20140311034YY) 國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(“863”)項(xiàng)目(2011AA100606) 2017年吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目
【分類號(hào)】:S567.219

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào):1837361

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