本文選題：家蠶 + 家蠶核型多角體病毒�。� 參考：《江蘇科技大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：家蠶是鱗翅目模式昆蟲,也是重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲。在中國和印度等發(fā)展中國家,蠶絲具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值,是很多地區(qū)農(nóng)民的主要收入來源。但是,家蠶病害的發(fā)生也給桑蠶業(yè)帶來了極大困擾。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì),每年因家蠶病害造成的損失約為總產(chǎn)量的三成,嚴(yán)重制約了蠶桑產(chǎn)業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展。病毒病是蠶業(yè)生產(chǎn)上危害最大的疾病,其中家蠶核型多角體病毒(Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus,Bm NPV)引起的血液型膿病危害最大,約占蠶病損失的70%,該蠶病目前還停留在預(yù)防階段。因此從生產(chǎn)和安全方面來講,家蠶核型多角體病毒抗性基因的尋找和抗性品種的組配都是一項(xiàng)重要工作。本課題采用耐Bm NPV蠶品種華康2號一代雜交種同蛾區(qū)交配形成的近交系抗性品系A(chǔ)N、抗Bm NPV蠶品種野三元N中的抗性親本野BN、Bm NPV中等抗性蠶品種大造(p50)和易感性品系C108作為研究材料,首先對不同家蠶品種對Bm NPV抵抗力大小進(jìn)行研究。在此基礎(chǔ)上,構(gòu)建抗性主基因連鎖分析群體和定位群體,通過遺傳育種技術(shù)、SSR分子標(biāo)記技術(shù)、HRM分析技術(shù)對抗性主基因進(jìn)行精細(xì)定位;用抗性品系A(chǔ)N、p50與C108構(gòu)建基因分離群體,利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)、HRM分析技術(shù)對Bm NPV抗性微效基因進(jìn)行初步連鎖分析。主要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和結(jié)果如下:1、家蠶AN品系Bm NPV抗性主基因的精細(xì)定位本研究根據(jù)抗性主基因的遺傳規(guī)律以及家蠶對Bm NPV的耐受性,選擇抗性品系A(chǔ)N作為母本(P1),感性品系C108作為父本(P2)及回交本,二者雜交組配F1群體;F1代雌性個體回交C108雄性個體組配BC1F,后代飼養(yǎng)至2齡起蠶后添食Bm NPV病毒多角體濃度為1×108/m L浸漬的桑葉,收集存活個體作為BC1F連鎖分析群體;F1代雄性個體回交C108雌性個體組配BC1M,飼養(yǎng)至2齡起蠶后添食Bm NPV病毒多角體濃度為1×108/m L浸漬的桑葉,收集存活個體作為BC1M定位分析群體。以此類推,組配BC2F和BC2M群體。用P1、P2和F1為模板,篩選與抗性主基因連鎖的多態(tài)性標(biāo)記;用BC1F和BC2F群體對抗性主基因進(jìn)行連鎖分析,確定其連鎖群;用BC1M和BC2M群體對其進(jìn)行定位分析。AN品系對Bm NPV抗性鑒定結(jié)果表明,在2齡起蠶經(jīng)口添食Bm NPV病毒多角體時,半數(shù)致死濃度(LC50)為2.154×109個/m L,半數(shù)致死劑量(LD50)為1.436×107個/頭蠶。綜合F1、BC1、BC2的經(jīng)口接種Bm NPV病毒多角體的半數(shù)致死濃度(LC50)結(jié)果可以認(rèn)為,AN品系對Bm NPV具有高度抗性,,該性狀受1個位于常染色體的顯性主基因控制,性染色體對AN品系Bm NPV高抗性沒有影響。通過SSR分子標(biāo)記HRM分析技術(shù)進(jìn)行連鎖分析表明,家蠶AN品系Bm NPV抗性主基因位于家蠶第27連鎖群。通過BC2M定位群體600余個體的基因組定位分析,繪制了遺傳總距離為29.1c M的AN品系Bm NPV抗性主基因遺傳連鎖圖,SSR標(biāo)記s2800-9(nscaf2800:1311765~1311847)和SSR標(biāo)記s2801-35(nscaf2800:117840~118038)位于該基因兩側(cè),抗性主基因與2個標(biāo)記的遺傳距離分別為5.2c M和2.9c M,由于兩個標(biāo)記間家蠶基因組序列存在一個gap,因此暫時無法實(shí)現(xiàn)進(jìn)一步的精細(xì)定位。2、家蠶野BN品系Bm NPV抗性主基因的定位分析以Bm NPV抗性品種野BN作為父本(P1),感性品系C108作為母本(P2)及回交親本,二者雜交組配F1群體;F1代雌性個體回交C108雄性個體構(gòu)建BC1F群體,后代飼養(yǎng)至2齡起蠶后添食濃度為1×108/m L的Bm NPV病毒多角體懸液浸漬的桑葉,收集存活個體作為BC1F連鎖分析群體;F1代雄性個體回交C108雌性個體構(gòu)建BC1M群體,飼養(yǎng)至2齡起蠶后添食濃度為1×108/m L的Bm NPV病毒多角體懸液浸漬的桑葉,收集存活個體作為BC1M基因組定位群體。以此類推,組配BC2F和BC2M群體。野BN對Bm NPV抗性鑒定結(jié)果表明,在2齡起蠶經(jīng)口添食Bm NPV病毒多角體時,野BN的半數(shù)致死濃度(LC50)為2.083×109個/m L,野BN的半數(shù)致死劑量(LD50)為2.5×107個/頭蠶。BC1F群體連鎖分析結(jié)果表明,野BN品種在第27連鎖群上存在著1個抗性主基因、其他連鎖群上可能還存在抗性主基因。通過對4個蛾區(qū)BC2M定位分析群體、第27連鎖群6個多態(tài)性標(biāo)記的HRM分析結(jié)果表明,野BN品種除了在第27連鎖群上存在著1個Bm NPV抗性主基因外,在27連鎖群以外確實(shí)存在著1個能夠耐受1×108/m L的Bm NPV病毒多角體懸液浸漬桑葉經(jīng)口添毒的抗性主基因。3、抗性微效基因的連鎖分析(1)抗性品系A(chǔ)N家蠶抗性品系A(chǔ)N對Bm NPV的抗性基因,除抗性主基因外還存在較多的抗性微效基因。選擇抗性品系A(chǔ)N作為母本(P1),易感性品系C108作為父本(P2)和回交親本,得到BC2F群體,飼養(yǎng)至2齡起蠶后添食濃度為1×107/m L的核型多角體病毒懸液浸漬桑葉,收集存活個體再對其進(jìn)行第27連鎖群分子標(biāo)記基因型鑒定,選擇其中無AN品系來源第27連鎖群(染色體)即無抗性主基因存在的蛾區(qū),組配BC3F、BC4F群體作為構(gòu)建抗性微效基因的連鎖分析群體。連鎖分析發(fā)現(xiàn),第6連鎖群上存在抗性微效基因。(2)抗性品系p50選擇抗性品系p50作為母本(P1),易感性品系C108作為父本(P2)及回交本,二者雜交組配F1群體;F1代雌性個體回交C108雄性個體,后代飼養(yǎng)至2齡起蠶后添食濃度為1×107/m L的Bm NPV病毒多角體浸漬的桑葉,收集存活個體作為BC1F群體。連鎖分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),抗性微效基因數(shù)量較多,廣泛存在于家蠶的基因組中,有可能是多個微效基因共同作用,導(dǎo)致p50品種對Bm NPV具有較高的抵抗性。
[Abstract]:The main experimental contents and results are as follows : 1 . The resistance gene of silkworm A strain Bm NPV is the main source of income . The results showed that the main gene of Bm NPV resistance was 5.2c M and 2.9c M . The results showed that the main gene of Bm NPV resistance was 5.2c M and 2.9c M . The results showed that the main gene of Bm NPV resistance was 5.2c M and 2.9c M . The results of linkage analysis showed that the resistant strain AN was used as female parent ( P1 ) , susceptible strain C108 as male parent ( P1 ) and susceptible strain C108 as male parent ( P2 ) and backcrossing parent .

【學(xué)位授予單位】：江蘇科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S884

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本文編號：1812414