本文選題：豬傳染性胃腸炎病毒 + M蛋白　； 參考：《西南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》2017年09期

【摘要】：篩選與豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)M蛋白相互作用的宿主蛋白,構(gòu)建M蛋白的誘餌載體pGBKT7-M.首先利用PCR技術(shù)從重組表達(dá)載體pFastBacTM-M中擴(kuò)增得到M基因,定向克隆至載體pMD19-T simple,驗(yàn)證正確后克隆至酵母雙雜交系統(tǒng)誘餌表達(dá)載體pGBKT7,經(jīng)雙酶切、PCR反應(yīng)及測(cè)序驗(yàn)證其正確插入后,利用PEG/LiAc法將構(gòu)建好的重組誘餌載體pGBKT7-M及空載體pGBKT7分別轉(zhuǎn)化到酵母Y2HGold感受態(tài)細(xì)胞中,檢測(cè)其對(duì)酵母菌株是否有毒性作用和自激活活性及誘餌蛋白在酵母細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況.結(jié)果表明:擴(kuò)增得到M基因738bp,成功構(gòu)建了誘餌表達(dá)載體pGBKT7-M,此誘餌載體對(duì)酵母細(xì)胞無(wú)細(xì)胞毒性和自激活活性.Western blot檢測(cè)到5×104左右的蛋白條帶,顯示誘餌蛋白在酵母細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá).
[Abstract]:The host protein interacting with TGEV M protein of porcine infectious gastroenteritis virus was screened and the bait vector pGBKT7-M was constructed. M gene was amplified from the recombinant expression vector pFastBacTM-M by PCR technique and cloned into the vector pMD19-T simple. and then cloned into yeast two-hybrid system bait expression vector pGBKT7. After double enzyme digestion and sequencing, the M gene was cloned into the vector pGBKT7. The recombinant decoy vector pGBKT7-M and empty vector pGBKT7 were transformed into yeast Y2HGold receptive cells by PEG/LiAc method, and the toxicity, self-activation activity and the expression of bait protein in yeast cells were detected. The results showed that the bait expression vector pGBKT7-Mwas successfully constructed by amplification of the M gene 738bp. the decoy vector had no cytotoxicity and self-activating activity. The protein bands of about 5 脳 10 ~ 4 were detected by Western blot, which showed that the bait protein was stably expressed in yeast cells.
【作者單位】： 西南大學(xué)(榮昌校區(qū))動(dòng)物醫(yī)學(xué)系;
【基金】：重慶市前沿與基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(cstc2014jcyjA80015) 重慶市研究生科研創(chuàng)新項(xiàng)目(CYS14057,CYS2015076)
【分類號(hào)】：S852.651

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本文編號(hào)：1807834