本文選題：心肌梗死 + LC3B基因��； 參考：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:研究心肌梗死病人和健康人群中LC3B基因啟動子序列變異情況,針對變異序列構(gòu)建重組質(zhì)粒,通過檢測雙熒光素酶的活性,對LC3B基因啟動子進行功能分析,探討LC3B基因啟動子序列變異與心肌梗死關(guān)聯(lián)的生物學(xué)實質(zhì),為心肌梗死的遺傳學(xué)分析提供理論依據(jù),為臨床上心肌梗死的預(yù)防、診斷、治療提供新的思路。方法:采用大樣本的病例對照研究方法對LC3B基因啟動子進行基因序列分析和功能測定,收集就診于濟寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院經(jīng)診斷為急性心肌梗死的病人383例,同期于濟寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院體檢的人群中隨機選取390例健康人為對照組,性別、年齡在兩組間無顯著差異,分別統(tǒng)計兩組人群的臨床資料。分別從病人組和對照組人群外周血中提取基因組DNA,根據(jù)LC3B基因的基因組序列,設(shè)計合成LC3B基因啟動子引物,采用普通PCR方法擴增兩組人群中LC3B基因啟動子序列,對DNA序列直接測序,分析兩組人群中LC3B基因啟動子序列變異情況。構(gòu)建含LC3B基因啟動子序列變異位點的pMD19-T載體,擴增后酶切和測序鑒定,亞克隆LC3B基因啟動子序列至pGL3-Basic螢火蟲熒光素酶報告基因載體,聯(lián)同PRL-TK海腎熒光素酶報告基因載體瞬時轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞和H9C2細(xì)胞,收集細(xì)胞裂解液后,采用雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒檢測兩種細(xì)胞中螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶的活性,初步探討LC3B基因啟動子序列變異對其轉(zhuǎn)錄活性的影響,及在H9C2細(xì)胞和HEK293細(xì)胞中的差異性轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果:1.該研究人群中發(fā)現(xiàn)25個DNA序列變異(DSVs),其中有12個單核苷酸多態(tài)性(SNPs)。在心肌梗死病人中,發(fā)現(xiàn)7個新穎DSVs,分別為g.4107TA,g.4325GC,g.4445delG,g.4597CG,g.4891CA,g.4903GT,g.4938CT和 3 個 SNPs,g.4137CT(rs575567442),g.4208CT(rs111626199)和 g.4853AG(rs77019223)。而這些DSVs在對照組中沒有發(fā)現(xiàn)。在對照組人群中,發(fā)現(xiàn)5個新穎雜合 DSVs:g.4106CT,g.4224TC,g.4889CG,g.4904CG,g.5001AC,和 2 個 SNPs:g.4175GC(rs543058021),g.4494AC(rs577616524),這 7個DSVs只在對照組中出現(xiàn)。其他8個DSVs,包括7個SNPs:g.4068GA(rs 552929429),g.4280CT(rs1 1117269),g.4282CT(rs532744297),g.4433GA(rsl 42738317),g.4631CG(rs35227715),g.4774GA(rs189170289),g.4883CA(r x16944733),和1個新穎DSV:g.4488GC,在MI組和對照組中均有出現(xiàn),且出現(xiàn)頻率在兩組中無區(qū)別(P0.05)。有趣的是,我們發(fā)現(xiàn)g.4883CA(rs16944733)和g.4889CG在發(fā)生頻率上緊密連鎖。2.在體外培養(yǎng)的HEK293細(xì)胞和H9C2細(xì)胞中,g.4107TA,g.4325GC,g.4597CG,g.4891CA,g.4903GT,g.4938CT和g.4137CT(rs575567442),g.4853AG(rs77019223),均能降低 LC3B 基因啟動子的轉(zhuǎn)錄活性(P0.05),未發(fā)現(xiàn)其他DSVs和SNPs改變LC3B基因啟動子的轉(zhuǎn)錄活性(P0.05)。結(jié)論:LC3B基因啟動子序列變異可能改變其轉(zhuǎn)錄活性,進而影響LC3B基因的表達(dá)水平,以不同信號途徑在心肌梗死的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。
[Abstract]:Objective: to study the variation of LC3B gene promoter sequence in patients with myocardial infarction and healthy population. To construct recombinant plasmid and analyze the function of LC3B gene promoter by detecting the activity of double luciferase. To explore the biological essence of the association between LC3B gene promoter sequence variation and myocardial infarction, to provide a theoretical basis for genetic analysis of myocardial infarction, and to provide a new idea for clinical prevention, diagnosis and treatment of myocardial infarction. Methods: a large sample case-control study was conducted to analyze the gene sequence and function of LC3B gene promoter. 383 patients diagnosed as acute myocardial infarction at the affiliated Hospital of Jining Medical College were collected. In the same period, 390 healthy people were randomly selected as control group in the affiliated hospital of Jining Medical College. There was no significant difference in sex and age between the two groups. The clinical data of the two groups were statistically analyzed. Genomic DNAs were extracted from peripheral blood of patients and control groups respectively. According to the genomic sequence of LC3B gene, primers of LC3B gene promoter were designed and synthesized, and the promoter sequences of LC3B gene were amplified by ordinary PCR method. The DNA sequence was sequenced and the variation of LC3B gene promoter sequence was analyzed in the two groups. The pMD19-T vector containing mutation site of LC3B promoter sequence was constructed. After amplification and sequencing, the promoter sequence of LC3B gene was subcloned into the luciferase reporter gene vector of pGL3-Basic firefly. After transient transfection of HEK293 cells and H9C2 cells with PRL-TK sea kidney luciferase reporter gene vector, double luciferase reporter gene assay kit was used to detect the activity of luciferase and luciferase in both cells. To explore the effect of LC3B promoter sequence variation on its transcriptional activity and its differential transcriptional activity in H9C2 cells and HEK293 cells. The result is 1: 1. A total of 25 DNA mutations were found in the study population, of which 12 were single nucleotide polymorphisms (SNPs). Among the patients with myocardial infarction, 7 novel DSVswere found, namely, g.4107TAA, 4325GCng, 4445delGng, 44597CGP, 4891CAN, 4903GTg.4938CT, and 3 SNPsrs5767442g.4208CTs111626199, and g.4853AGRs7701923, respectively. These DSVs were not found in the control group. In the control group, five novel heterozygous DSVs: G. 4106CTN, g. 4224TCU, g. 4889CGN. 4904CGN. 5001AC, and two SNPs: G. 4175GCnrs543058021 and g.4494ACrs57761652424 were found. These 7 DSVs were only found in the control group. The other 8 DSVs, including 7 SNPs:g.4068GA(rs 552929429, rs1 1117269G. 4282CTS 53 2744297G. 4433GArsl 427383171CGS35227715g.4774GArs18902883CAr x 16944733GC, were found in MI group and control group, and the frequency was no difference between the two groups (P0.05). Interestingly, we found that g.4883CAA rs16944733) and g.4889CG are closely linked to frequency. 2. In both HEK293 cells and H9C2 cells cultured in vitro, the transcriptional activity of LC3B gene promoter P0.05 was decreased by G. 4107TAG. 4325GCCP4597CGN. 4891CGT. 4903GTG. 4938CT and g.4137CTrs575567442ng. 4853AGS770192323232323. No other DSVs and SNPs altered the transcriptional activity of LC3B gene promoter (P0.05N), and no other DSVs and SNPs could alter the transcriptional activity of LC3B gene promoter. Conclusion the mutation of the promoter sequence of the 10% LC3B gene may change its transcription activity, and then affect the expression level of LC3B gene, and play an important role in the occurrence and development of myocardial infarction through different signal pathways.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R542.22

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本文編號：1780570