本文選題：抑制素 + 基因免疫　； 參考：《湖南農業(yè)大學》2016年碩士論文

【摘要】：本研究采用酶聯(lián)免疫測定、組織切片技術、熒光定量PCR和蛋白免疫印跡等方法與手段,分析口服新型非抗性抑制素基因疫苗對雄性大鼠精子發(fā)育、睪丸組織結構、激素水平及精子發(fā)生相關基因和蛋白的表達作用,探究新型抑制素基因疫苗對大鼠精子發(fā)生的作用機制。1口服抑制素基因疫苗對雄性大鼠免疫應答的影響用不同菌落數(shù)新型抑制素基因疫苗PXAIS (1010CFU/mL,109CFU/mL,108CFU/mL)各4mL口服免疫大鼠,初次免疫二周后加強免疫二次,用ELISA檢測不同時期血清抗體吸光值。研究結果表明：(1)三個免疫組血清抗體P／N值均有不同程度的升高,中劑量組在第一次加強免疫后第一周P／N值(1.64+0.21)與對照組相比有極顯著差異(P0.01);(2)高劑量組在第一次加強免疫后第一周P／N值(1.49+0.30)與對照組有顯著差異(P0.05);(3)低劑量組在第一次加強免疫后第一周P／N值(1.56+0.35)與對照組相比有顯著差異(P0.05)。2口服抑制素基因疫苗對雄性大鼠精子發(fā)育的影響斷頸處理大鼠以檢測大鼠臟器系數(shù)、臟器體積、精子數(shù)和畸形率的變化,研究結果表明：(1)實驗組睪丸體積明顯升高,且低劑量在和中劑量組大鼠睪丸體積與對照組相比差異顯著(P0.05),但對對附睪體積沒有明顯影響(P0.05);(2)高劑量組睪丸系數(shù)(0.93±0.06)與對照組相比差異極顯著(P0.01),低劑量組附睪系數(shù)(0.27±0.02)與對照組相比差異顯著(P0.05),各實驗組精囊腺臟器系數(shù)與對照組相比沒有顯著影響(P0.05);(3)實驗組精子數(shù)量升高,畸形率降低,其中高劑量組精子數(shù)量(8.41+0.63)和畸形率(19.88+2.72)與空質粒組相比差異顯著(P0.05),且中劑量組精子數(shù)量(9.58+2.19)和畸形率(18.50+2.30)與空質粒組相比有極顯著差異(P0.01)。3口服抑制素基因疫苗對雄性大鼠睪丸組織結構的影響HE染色后在光學顯微鏡下觀察大鼠睪丸組織形態(tài)學變化,研究結果表明：(1)各組睪丸組織生精小管外有完整的基膜,生精細胞發(fā)育正常,層次較清楚；(2)各組生精小管內生精細胞數(shù)量不同,中劑量組和對照組相比,生精細胞層數(shù)增加,管壁基膜變厚,官腔空隙變窄,腔隙中胞質殘余增加。4口服抑制素基因疫苗對雄性大鼠內分泌激素水平的影響本實驗采用ELISA技術檢測各組不同時期血清中抑制素B(INHB)、促卵泡素(FSH)、黃體生成素(LH)和睪酮(T)激素水平變化,研究結果表明：(1)免疫后三個實驗組血清抑制素B水平均有不同程度降低,低劑量組在初次免疫后第二周(15.66+0.51)與對照組相比差異顯著(P0.05),中劑量組在第一次加強免疫后第一周(14.414-1.10)出現(xiàn)最低值,并與對照和空質粒組相比差異極顯著(P0.01);(2)免疫后各實驗組FSH水平與對照組相比明顯升高,初次免疫后第二周,中劑量組(6.02+0.12)和高劑量組(5.92+0.35)與對照組和空質粒組相比差異極顯著(P0.01),在免疫后第三周里,低劑量組(5.53+0.16)與對照組相比差異顯著(P0.05);(3)與對照組相比,低劑量和中劑量組LH有所降低,初次免疫后第一周中劑量組LH水平(14.48+0.67)與空質粒組相比差異顯著(P)0.05),初次免疫后第二周LH含量繼續(xù)下降,中劑量組(14.01+0.63)和低劑量組(13.84±0.40)與空質粒組差異顯著護0.05),低劑量組與對照組差異顯著(P0.05);(4)對照組和空質粒組從第一周到第七周睪酮(T)分泌水平變化不明顯,低劑量組第一次加強免疫后第二周(74.82±4.50)與對照組差異顯著(P0.05),其余周次均無明顯變化,初次免疫第一周中劑量組水平(76.41±3.75)升高,且與對照組相比差異顯著(P)0.05),中劑量組初次免疫后和第一次加強免疫后第二周(86.57±6.29)與對照組和空質粒組相比均差異極顯著(P0.01)。5口服抑制素基因疫苗對雄性大鼠精子發(fā)生相關基因和蛋白的影響采用RT-PCR和蛋白免疫印跡分別檢測大鼠睪丸組織中INHβB、Vimentin、SMAD4基因在mRNA和蛋白水平的表達變化,研究結果表明：(1)抑制素基因疫苗免疫大鼠能降低INHβB亞基表達,中劑量組(19.40±3.60)和對照組(23.13+1.02)mRNA表達水平差異顯著(P0.05)；中劑量組和高劑量組蛋白表達水平與對照組相比均差異極顯著(P0.01)；低劑量組INHβB蛋白表達水平與對照組差異顯著(P0.05)。(2)各免疫組Vimentin mRNA水平表達升高,三個實驗組與對照組相比均有統(tǒng)計學意義,其中低劑量組(20.14+2.74)與對照組(17.65±1.49)差異顯著(P0.05),中劑量組(22.01±1.60)與對照組和空質粒組相比均差異極顯著(p0.01),高劑量組(21.09士2.11)與對照組和空質粒組相比差異顯著(P0.05)；各免疫組Vimentin蛋白水平表達升高,且均與對照組差異極顯著(p0.01)；(3)中劑量組和高劑量組Smad4 mRNA表達升高,中劑量組(25.32±3.11)與對照組(19.93±1.15)和空質粒組(19.92±0.89)相比均差異極顯著(P0.01),高劑量組(22.36±1.98)與對照組和空質粒組以及中劑量組相比均有顯著差異(P0.05),低劑量組與對照組無明顯差異((P0.05))；免疫組Smad4蛋白表達水平均上調,中劑量組和高劑量組與對照組相比均有極顯著差異(P0.01),低劑量組與對照組差異顯著(P0.05)。綜上,一方面,抑制素基因疫苗能引起雄性大鼠的免疫應答,升高精子數(shù)量,降低精子畸形率,促進精子發(fā)育；另一方面,免疫降低了雄性大鼠內分泌激素抑制素B和LH的的分泌,升高FSH和T的分泌,并上調了Smad4、Vimentin基因mRNA和蛋白表達的水平,下調了INHβB亞基基因mRNA和蛋白表達的水平,說明抑制素基因疫苗免疫能通過引起雄性大鼠內分泌激素水平和基因蛋白表達的變化,改善雄性大鼠的精子發(fā)生。
[Abstract]:The results showed that : ( 1 ) The serum antibody P / N of the experimental group was significantly higher than that in the control group ( P0.05 ) ; ( 3 ) The number of sperm in the high dose group was higher than that in the control group ( P0.05 ) .
Compared with the control group , the levels of LH , FSH , LH and T were significantly higher than those in the control group ( P < 0.05 ) .
Compared with the control group , the expression level of high - dose group and high - dose group was significantly higher than that in the control group ( P0.01 ) .
( 2 ) The level of vimentin mRNA was significantly higher in the low - dose group ( 20.14 + 2.74 ) than that in the control group ( P < 0.01 ) .
The expression of Vimentin in each group was significantly higher than that in the control group ( p < 0.01 ) .
( 3 ) Compared with the control group ( 19.93 鹵 1.15 ) and the empty plasmid group ( 19.92 鹵 0.89 ) , the expression of Smad4 mRNA in the middle dose group and the high dose group was significantly higher than that in the control group ( 19.93 鹵 1.15 ) and the empty plasmid group ( 19.92 鹵 0.89 ) ( P < 0.01 ) .
The expression level of Smad4 protein in the vaccinated group was up - regulated , the middle - dose group and the high - dose group had significant difference compared with the control group ( P0.01 ) , the difference between the low - dose group and the control group was significant ( P0.05 ) . On the one hand , the inhibition of the gene vaccine could induce the immune response of the male rats , increase the sperm count , reduce the sperm deformity rate and promote the development of the sperm ;
On the other hand , immunity decreased the secretion of hormone B and LH in male rats , increased the secretion of FSH and T , up - regulated the level of Smad4 and Vimentin gene mRNA and protein expression , downregulated the level of mRNA and protein expression of INH尾B subunit gene , and indicated that the immunity of the gene vaccine could improve the sperm production of male rats by inducing changes of endocrine hormone level and gene protein expression in male rats .

【學位授予單位】：湖南農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S814.1

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 李悅;陳偉貞;陳建國;胡長敏;劉東明;丁明星;韓麗;;小鼠抑制素α亞基在桿狀病毒表達系統(tǒng)中的表達和純化[J];中國獸醫(yī)科學;2015年12期

2 張宏梅;鄭文_g;李瑤;姜曉明;馮憲敏;;減毒沙門菌攜帶CWP2-S基因抗賈第蟲口服疫苗的免疫原性[J];中國獸醫(yī)雜志;2015年09期

3 黃增文;木爾扎提;吾熱力哈孜·哈孜汗;;也木勒羊抑制素α亞基基因克隆及其真核表達[J];中國畜牧獸醫(yī);2015年06期

4 劉清源;向華;黃元;陳晶;向蓉;鄭海學;劉宇;;攜帶FMDVDNA疫苗重組減毒沙門氏菌的構建及其安全性和穩(wěn)定性研究[J];廣東農業(yè)科學;2015年08期

5 廖黎黎;黃永漢;何磊;梁小麗;徐杰偉;;無精子癥患者睪丸生精功能與血清性激素水平的相關性分析[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2015年02期

6 劉安娜;王厚照;;高溫工作環(huán)境對男性精液質量的影響分析[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2015年02期

7 王鴻祥;陳斌;胡凱;金炎;楊祺;韓銀發(fā);王益鑫;黃翼然;;抑制素B用于預測少弱精癥患者精索靜脈曲張術預后研究[J];中國計劃生育和婦產科;2015年01期

8 鄧永鍵;經芳艷;周娜;胡勇華;陳君洋;褚慶軍;;結合血清卵泡刺激素、抑制素B、染色體核型和Y染色體AZF基因微缺失與睪丸穿刺取精術成功率的相關性[J];南方醫(yī)科大學學報;2014年10期

9 應俊;薛良義;;大黃魚肌肉生長抑制素-1前肽原核表達、多克隆抗體制備和功能驗證[J];中國細胞生物學學報;2014年10期

10 王水蓮;馮建忠;李文平;夏迪;盧向陽;楊利國;;非抗性篩選抑制素基因疫苗免疫對奶牛產后子宮復舊的影響[J];湖南農業(yè)大學學報(自然科學版);2014年04期

相關會議論文 前1條

1 劉月琴;張英杰;唐玉雙;吳麗卿;;抑制素主動免疫對遼寧絨山羊公羊夏季精液品質的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物繁殖學分會第十五屆學術研討會論文集（下冊）[C];2010年

相關博士學位論文 前4條

1 趙中權;抑制素對山羊繁殖力的影響[D];西南大學;2011年

2 韓麗;抑制素新型基因工程疫苗的構建及其免疫效果研究[D];華中農業(yè)大學;2009年

3 耿利英;脂質體介導抑制素基因轉染對牛卵泡細胞及胚胎發(fā)育的影響及機制研究[D];華中農業(yè)大學;2008年

4 徐引弟;豬霍亂沙門氏菌C500株crpˉ、asdˉ缺失株平衡致死系統(tǒng)的構建及應用[D];華中農業(yè)大學;2006年

相關碩士學位論文 前5條

1 蔣靜思;抑制素基因轉染對大鼠間質細胞增殖、凋亡和激素分泌的影響[D];湖南農業(yè)大學;2014年

2 周婉楓;無抗性標記抑制素基因疫苗對雄性大鼠生殖的調控作用[D];湖南農業(yè)大學;2014年

3 魯守琳;TGF-β_1、Smad4和Smad7在SD大鼠模型慢性非細菌性前列腺組織中表達及意義[D];蘭州大學;2010年

4 胡冬利;湖羊高繁殖力相關基因mRNA表達水平與多態(tài)性分析[D];南京農業(yè)大學;2009年

5 陳守云;抑制素被動免疫對羊生殖激素及卵泡顆粒細胞凋亡的影響[D];四川農業(yè)大學;2008年

，

本文編號：1759549