本文選題：骨髓移植 + 免疫缺陷��； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景和目的異基因造血干細胞移植后胸腺萎縮及功能缺陷導(dǎo)致的免疫重建延遲,是導(dǎo)致移植后感染死亡和疾病復(fù)發(fā)的重要原因之一。如何促進移植后受損胸腺再生及功能恢復(fù)是本領(lǐng)域的研究熱點。近年來,腦腸肽(Ghrelin,GRL)的免疫調(diào)節(jié)作用已越來越受到人們的重視,研究報道,GRL能逆轉(zhuǎn)老年鼠胸腺萎縮狀態(tài),恢復(fù)年輕化。但GRL對造血干細胞移植后胸腺作用的相關(guān)研究仍不多。本研究通過構(gòu)建清髓性異基因骨髓造血干細胞移植模型,在清髓性全身照射和移植前后不同時間點輸注GRL,初步探討GRL對移植后小鼠胸腺的再生作用。研究方法:1.建立清髓性異基因骨髓移植模型,供鼠為C57BL/6小鼠(H-2Kb),受鼠為 BALB/c 小鼠(H-2Kd)。分別對全身照射(Total body irradiation,TBI)劑量(7.0Gy,7.5Gy,8.0Gy)和輸注骨髓單個核細胞(BMNCs)數(shù)量(0.5x107,1.0x107,2.0x107)進行摸索。隨后觀察小鼠一般情況、GVHD表現(xiàn)、植入情況。2.為觀察腦腸肽對清髓性TBI后小鼠損傷胸腺作用,120只小鼠隨機分為4組,分別在TBI前7天(A1組)、TBI后1天(B1組)開始給予GRL或僅給予磷酸鹽溶液(C1組),直至實驗結(jié)束,D1組作為正常對照,不做任何處理。分別于TBI后1、7、14天分批處死各組小鼠,取胸腺組織計算胸腺細胞總數(shù)、HE染色及免疫熒光標記分析胸腺結(jié)構(gòu)變化,流式細胞儀檢測胸腺各亞群細胞亞群的比例。3.為觀察 GRL 對骨髓移植(Bone marrow transplantation,BMT)后小鼠胸腺再生作用,120只小鼠隨機分為4組,分別在BMT前7天(A2組)、BMT后1天(B2組)開始給予GRL或僅給予磷酸鹽溶液(C2組),直至實驗結(jié)束,D2組作為正常對照,不做任何處理。分別于移植后14、21、28天分批處死各組小鼠,取胸腺組織計算胸腺細胞總數(shù)、HE染色及免疫熒光標記分析胸腺結(jié)構(gòu)變化,流式細胞儀檢測胸腺各亞群細胞亞群的比例,用SYBR Green I法相對定量PCR檢測外周血sjTREC水平。結(jié)果:1.接受7.5GyTBI小鼠全部于30天內(nèi)死亡,且死亡前檢測白細胞數(shù)量均小于0.5×109/L,為造血衰竭狀態(tài)。本實驗選用7.5Gy作為清髓性預(yù)處理方案。輸注0.5x107,1.0x107,2.0x107個BMNCs組小鼠均能長期生存,但骨髓細胞植入分析結(jié)果顯示,0.5x107個,1.Ox107個BMNCs小鼠為混合植入,輸注2.0x107個BMNCs小鼠為完全植入。2.GRL對TBI后小鼠胸腺作用:(1)胸腺結(jié)構(gòu)變化:GRL治療的小鼠胸腺上皮細胞變性壞死明顯減輕,在TBI后1天,給予GRL保護的A1組小鼠胸腺結(jié)構(gòu)仍保持正常皮髓交界,而C1組已出現(xiàn)明顯萎縮及細胞凋亡。(2)胸腺內(nèi)T細胞變化:與C1組相比,GRL治療胸腺各T淋巴細胞亞群失衡程度明顯減輕,且各組T淋巴細胞亞群絕對數(shù)較高。在移植前給予GRL的A1組尤為明顯,在TBI 后 14 天,A1 組及 C1 組 CD4-CD8-、CD4+CD8+、CD4+、CD8+T 細胞絕對數(shù)分別為(5.08±0.48)x106vs(2.86±0.57)x106,(P0.05)、(3.62±0.69)x106vs(1.38±0.89)x106,(P0.05)、(0.65±0.08)x106vs(0.22±0.09)x106,(P0.05)、(0.55±0.30)x106vs(0.24±0.09)x106,(P0.05)。3.GRL對BMT后小鼠胸腺作用:(1)胸腺結(jié)構(gòu)變化:與C2組相比,GRL治療的小鼠胸腺結(jié)構(gòu)恢復(fù)迅速,胸腺細胞凋亡較少,在移植后28天,A2組小鼠結(jié)構(gòu)已基本恢復(fù)正常,且代表胸腺基質(zhì)祖細胞的K5+K8+細胞明顯較C2組增多。(2)胸腺內(nèi)T細胞變化:GRL治療小鼠胸腺各T淋巴細胞亞群失衡程度較C2組明顯較輕,未成熟雙陰細胞比例相對減少,雙陽細胞比例明顯增高,且明顯提高胸腺內(nèi)發(fā)育成熟的CD4+細胞比例,但對CD8+細胞比例無明顯影響。移植后28天,A2及B2組CD4+絕對數(shù)分別為(9.51±1.59)x106及(6.96±1.26)x106,均明顯高于C2組(4.90±1.80)x106(P0.05)。移植后21,28天A2組外周血TREC水平均明顯高于C2組(P0.05)。結(jié)論:GRL能在一定程度上保護小鼠胸腺免受移植前預(yù)處理損傷,增強胸腺對移植前預(yù)處理損傷抵抗,促進損傷胸腺結(jié)構(gòu)的修復(fù)及胸腺細胞增殖并且能促進未成熟T細胞從雙陰性向雙陽性細胞分化,促進向胸腺細胞向成熟CD4+T細胞分化,增強胸腺輸出功能,加快中樞免疫重建。
[Abstract]:In recent years , the effects of GRL on thymus regeneration of mice after transplantation were studied . ( 2 ) The percentage of T lymphocyte subsets in thymus was significantly higher than that of C2 group ( 5.08 鹵 0.48 ) x106 vs ( 6.96 鹵 1.26 ) x106 , ( P 0.05 ) , ( 3.62 鹵 0.69 ) x106 , ( P0.05 ) , ( 3.62 鹵 0.69 ) x106 vs ( 4.90 鹵 1.80 ) x106 ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R457.7

【參考文獻】

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1 李江;尹帆;馬勇江;張媛;李英;李玉谷;;Ghrelin對雌激素誘導(dǎo)小鼠胸腺細胞凋亡的抑制作用[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2012年05期

2 納寧;何善陽;徐霖;陳康;何霞;廖冰;曹開源;;同種異基因造血干細胞移植急性移植物抗宿主病小鼠模型的制作[J];中華器官移植雜志;2011年10期

3 李揚秋,楊力建,陳少華,陳嘉愉,劉薇薇,王震,張玉平,吳秀麗;實時定量PCR檢測正常人外周血T細胞和胸腺細胞中sjTRECs水平[J];現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志;2001年06期

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本文編號：1742114