本文選題：金黃色葡萄球菌　切入點：氟苯尼考　出處：《動物醫(yī)學進展》2017年12期

【摘要】：從100個奶牛場環(huán)境及膿汁樣品中分離、鑒定了9株奶牛源耐氟苯尼考金黃色葡萄球菌,分別提取質粒DNA和基因組DNA,通過特異性引物進行PCR擴增氟苯尼考耐藥基因fexA,以質粒DNA為模板的PCR分別擴增出了1 446bp特異性目的片段,而以基因組DNA為模板的PCR未擴增出該目的片段。將該目的片段克隆到pET-32(a)載體上,成功構建了pET-fexA質粒載體,將質粒載體轉入BL21中,藥物敏感性試驗顯示構建的pET-fexA/BL21基因工程菌對氯霉素和氟苯尼考高度耐藥。同時,fexA陽性金黃色葡萄球菌分離株對氯霉素和氟苯尼考的耐藥性顯著高于質控菌株,說明fexA基因貢獻細菌對氯霉素和氟苯尼考的交叉耐藥。成功構建了一個基因背景清楚且對氟苯尼考耐藥的細菌模型,排除了細菌中其他氟苯尼考耐藥基因或泵出蛋白對fexA基因貢獻細菌耐藥的影響,為fexA基因編碼的蛋白定位研究奠定了基礎。
[Abstract]:Nine strains of staphylococcus aureus resistant to florfenicol were isolated from 100 dairy farm environment and pus samples.Plasmid DNA and genomic DNA were extracted, and florfenicol resistance gene fexA was amplified by PCR with specific primers. The 1 446bp specific target fragment was amplified by PCR using plasmid DNA as template.However, the PCR with genomic DNA as template did not amplify the target fragment.The target fragment was cloned into pET-32a) vector and pET-fexA plasmid vector was successfully constructed. The plasmid vector was transferred into BL21. The drug sensitivity test showed that the constructed pET-fexA/BL21 gene engineering strain was highly resistant to chloramphenicol and florfenicol.The resistance to chloramphenicol and florfenicol of Staphylococcus aureus isolates was significantly higher than that of quality control strains, indicating that fexA gene contributed to the cross resistance of bacteria to chloramphenicol and florfenicol.A bacterial model with a clear genetic background and resistance to florfenicol was successfully constructed, which excluded the effect of other florfenicol resistance genes or pump proteins on the drug resistance of bacteria contributing to the fexA gene.It lays a foundation for the study of protein localization of fexA gene.
【作者單位】： 四川省畜牧科學研究院;動物遺傳育種四川省重點實驗室;
【基金】：四川省畜牧科學研究院基本科研業(yè)務專項(SASA2014A14)
【分類號】：S852.611

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