本文選題：腺病毒科　切入點：分型　出處：《軍事醫(yī)學》2017年02期

【摘要】：目的建立一種高通量、快速、準確甄別3、7、14、11和55型腺病毒的化學發(fā)光基因芯片方法。方法從GenBank中查找這5種腺病毒特異性基因保守區(qū),設計分型的探針并在篩選后進行合成,用于制備寡核苷酸基因芯片。運用多重不對稱PCR法擴增特異性基因片段,將擴增產(chǎn)物與基因芯片上的特異性探針雜交,經(jīng)過洗滌、化學發(fā)光顯色后,進行結(jié)果分析。在優(yōu)化的多重PCR體系、雜交條件和化學發(fā)光檢測條件下,對芯片的特異性、靈敏性和重復性進行評價。結(jié)果建立的基因芯片方法具有良好的特異性、靈敏性和重復性,檢測質(zhì)粒參考品最低檢測限為3×10~3拷貝/反應,38例臨床樣本的分型結(jié)果與測序法結(jié)果基本一致(37/38)。結(jié)論建立了一種能快速、靈敏、特異區(qū)分5種腺病毒型別的基因芯片分型方法,為腺病毒分型提供一種新的檢測手段。
[Abstract]:Objective to establish a high throughput, rapid and accurate chemiluminescence gene chip method for identifying adenovirus type 3, 7, 1411 and 55. Methods the specific conserved regions of these five adenovirus genes were found from GenBank, the probe for typing was designed and synthesized after screening. Oligonucleotide gene chip was prepared. Specific gene fragments were amplified by multiple asymmetric PCR method. The products were hybridized with specific probes on the gene chip. After washing and chemiluminescence reaction, The results were analyzed. The specificity, sensitivity and repeatability of the microarray were evaluated under the optimized multiplex PCR system, hybridization conditions and chemiluminescence detection conditions. Sensitivity and reproducibility. The minimum detection limit of plasmid reference was 3 脳 10 ~ (-3) copy / reaction. The typing results of 38 clinical samples were in good agreement with the results of sequencing method. Conclusion A rapid and sensitive method was established. The gene chip typing method which specifically distinguishes 5 adenovirus types provides a new detection method for adenovirus typing.
【作者單位】： 河北北方學院;軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所;解放軍309醫(yī)院;
【基金】：國家科技重大專項“重大新藥創(chuàng)制”資助項目(2015ZX09J15105-001-001)
【分類號】：R440;R511

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本文編號：1699477