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茶樹類黃酮3′-羥化酶基因的克隆與表達特性分析

發(fā)布時間:2018-03-15 00:08

  本文選題:茶樹 切入點:類黃酮′-羥化酶 出處:《茶葉科學》2017年01期  論文類型:期刊論文


【摘要】:類黃酮3′-羥化酶(Flavonoid 3′-hydroxylase,F3′H)是細胞色素P450酶家族(Cytochrome P450,CYP450)的單加氧酶,在植物次生代謝和逆境調(diào)控方面起著重要的作用。本實驗以茶樹品種龍井43作為試驗材料,利用RT-PCR方法,從c DNA中克隆得到茶樹中編碼類黃酮3′-羥化酶基因,命名為Cs F3′H1。序列分析顯示,Cs F3′H1基因開放閱讀框為1 530 bp,編碼509個氨基酸,含有相對保守的P450酶系結(jié)合域。進化樹分析表明,Cs F3′H1與Cs F3′H3的進化樹關(guān)系相近,與Cs F3′H2的進化樹關(guān)系較遠。序列多重比對顯示,Cs F3′H1蛋白具有F3′H蛋白的特征基序,并與高粱、獼猴桃、楊樹、擬南芥和葡萄同源蛋白一致性為66.48%。氨基酸組分、理化性質(zhì)、親水性/疏水性和無序化分析顯示,Cs F3′H1是親水性蛋白,無序化特征不明顯。利用實時熒光定量PCR對Cs F3′H1基因在茶樹不同組織和不同激素處理下的表達譜進行檢測,結(jié)果顯示:不同組織中,Cs F3′H1基因的表達水平在第一葉中最高,之后隨著葉片的成熟逐漸下降,Cs F3′H1基因在老葉和根中幾乎不表達,表達水平從高到低依次為第一葉第二葉第三葉第四葉嫩莖根老葉;在不同激素處理中,Cs F3′H1在SA激素處理下的表達量最高,為對照的2.24倍,在Me JA處理下表達量最低,為對照的0.43倍。
[Abstract]:Flavonoid 3-hydroxylase (F3H) is a monooxygenase of cytochrome P450 (CYP450), which plays an important role in plant secondary metabolism and stress regulation. Longjing 43, a tea plant cultivar, was used as experimental material and RT-PCR method was used in this experiment. The coding gene of flavonoid 3-mo-hydroxylase in tea plant was cloned from c DNA and named as Cs F3H1. Sequence analysis showed that the open reading frame of CS-F3OH1 gene was 1 530bp, encoding 509 amino acids. The phylogenetic tree analysis shows that the phylogenetic tree of Cs F3H1 is similar to that of Cs F3H3, and the relationship is far from that of CS-F3H3.The sequence multiple alignment shows that the F3H1 protein has the characteristic motif of F3H1 and has the characteristic motif with sorghum. The homologous protein identity of kiwifruit, poplar, Arabidopsis thaliana and grape was 66.48.The amino acid composition, physicochemical properties, hydrophilicity / hydrophobicity and disordering showed that Cs F3H1 was a hydrophilic protein. The expression profiles of Cs F3OH1 gene in different tissues and different hormone treatments of tea plants were detected by real-time fluorescence quantitative PCR. The results showed that the expression level of Cs F3OH1 gene in different tissues was the highest in the first leaf. After that, the expression level of Cs F3H1 gene was almost not expressed in the old leaves and roots with the maturation of the leaves. The order of expression level from high to low was the first leaf, the second leaf, the third leaf, the third leaf, the tender stem root, and the old leaf, the first leaf, the second leaf, the third leaf and the young stem root. In different hormone treatments, the expression of Cs F3H1 was the highest under SA hormone treatment, 2.24 times of that of the control, and the lowest under me JA treatment, 0.43 times of the control.
【作者單位】: 南京農(nóng)業(yè)大學園藝學院茶葉科學研究所;
【基金】:國家自然科學基金(31570691)
【分類號】:S571.1

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本文編號:1613540


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