發(fā)布時間：2018-03-13 11:05

  本文選題：甜菜樹　切入點：貝殼杉烯合酶　出處：《食品與生物技術(shù)學(xué)報》2017年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：本文作者研究了赤霉素合成途徑中的關(guān)鍵酶-貝殼杉烯合酶,對其功能的研究可以為以后優(yōu)化品種提供基因?qū)用娴幕A(chǔ)。首先通過RACE-PCR技術(shù),從甜菜樹葉片中克隆得到貝殼杉烯合酶基因(Ent-kaurene synthase gene,Yl KS)的全長c DNA,共2 512 bp(Gen Bank登錄號為KP872698),其ORF長度為2 232 bp,共編碼743個氨基酸,預(yù)測蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量大小為84 987,蛋白質(zhì)等電點為5.264,表明該蛋白質(zhì)呈酸性。將該基因構(gòu)建到表達載體pET32a中,得到重組質(zhì)粒pET-32a-Yl KS。通過將p GG/An2、p IRS和重組質(zhì)粒pET-32a-Yl KS 3個質(zhì)粒共轉(zhuǎn)入菌株BL21(DE3)中,得到重組菌株,并進行發(fā)酵。通過SDS-PAGE分析發(fā)現(xiàn),重組蛋白成功得到了表達。最后通過對發(fā)酵產(chǎn)物進行萃取,并使用GC-MS進行檢測,確定了該基因所編碼的酶確實是貝殼杉烯合酶。
[Abstract]:In this paper, we studied the key enzyme of gibberellin synthesis pathway-kainiaxene synthase. The study of its function can provide the basis of gene level for the later optimization of varieties. Firstly, we use RACE-PCR technique to optimize the gene level of gibberellin synthase. The full-length cDNA of Ent-kaurene synthase gene Yl KS) was cloned from leaves of sugarbeet. The total number of bp(Gen Bank was KP872698, and the length of ORF was 2 232 BP, encoding 743 amino acids. The predicted molecular weight and isoelectric point of the protein were 84 987 and 5.264 respectively, which indicated that the protein was acidic. The gene was constructed into the expression vector pET32a. The recombinant plasmid pET-32a-Yl KS. the recombinant strain was obtained by co-transferring the three plasmids of p G / An2P IRS and recombinant plasmid pET-32a-Yl KS into strain BL21DDE3. The recombinant strain was found by SDS-PAGE analysis. The recombinant protein was successfully expressed. Finally, the enzyme encoded by the gene was determined by extracting the fermentation product and detecting by GC-MS.
【作者單位】： 林木遺傳育種國家重點實驗室中國林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所;四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院;中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院/中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)藥物研究所;中國科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點實驗室;
【基金】：中國林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費專項(RIF2014-01);中國林業(yè)科學(xué)研究院中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費專項(CAFYBB2012042)
【分類號】：Q943.2;S649

【相似文獻】

相關(guān)會議論文 前1條

1 歐春青;宣利利;姜淑苓;王斐;程飛飛;馬力;李連文;張靜茹;;梨貝殼杉烯氧化酶基因克隆及表達分析[A];中國園藝學(xué)會2011年學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 石琰景;果樹GA生物合成基因——貝殼杉烯氧化酶和20-氧化酶的克隆及表達模式的初步研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2002年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 宣利利;梨GA20-氧化酶和貝殼杉烯氧化酶基因克隆及表達分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

，

本文編號：1606106