本文選題：小尾寒羊　切入點：乳房炎　出處：《甘肅農業(yè)大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：Toll樣受體(Toll-likereceptors,TLRs)是一類可以識別病原體相關分子模式(pathogen associated molecule patterns,PAMPs),結構中擁有富含亮氨酸重復序列胞外域的I型跨膜蛋白。它可以激活下游炎癥通路,誘導機體免疫系統(tǒng)分泌相應細胞因子,以清除或抵御相應的病原微生物。小尾寒羊乳房炎的發(fā)生,一直是阻礙養(yǎng)羊業(yè)發(fā)展的重要原因,如何利用TLR在天然免疫中的重要作用,預防和治療細菌性乳房炎成為新的研究熱點。為研究TLRs在大腸桿菌(Escherichia coli)侵入小尾寒羊(Ovis aries)乳腺組織后在小尾寒羊外周血白細胞和乳腺組織中的表達情況,實驗采用人工感染大腸桿菌(O113型),采用qRT-PCR檢測大腸桿菌感染乳腺組織12h、24h、36h、48h、72h后,血液和乳腺組織中TLRs基因的相對表達量;利用Western-blot方法對乳腺組織感染大腸桿菌后不同時間段內TLRs蛋白的相對表達量進行研究。結果顯示,在大腸桿菌侵入小尾寒羊乳腺后,在小尾寒羊外周血白細胞中,除TLR8外,TLR1~10均有表達,其中在大腸桿菌感染24h后小尾寒羊外周血白細胞中TLR2、3、4、5mRNA均出現(xiàn)顯著或極顯著升高;感染36h后TLR2、3、4、5、6、7mRNA均出現(xiàn)顯著或極顯著升高;48h后TLR2、4、5mRNA均出現(xiàn)顯著或極顯著升高。在小尾寒羊乳腺組織中結果顯示TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR10的相對表達量在感染大腸桿菌后均有所升高,其中在12h時TLR1、4、6出現(xiàn)顯著升高;24h時TLR2、4出現(xiàn)顯著或極顯著升高;36h時TLR1、2、4出現(xiàn)顯著或極顯著升高;48h時TLR1、2、4、6出現(xiàn)顯著或極顯著升高;72h時TLR2、4、7、10出現(xiàn)顯著或極顯著升高。各處理組與對照組相比TLRs蛋白表達隨感染時間的延長而上調,在感染36h時均出現(xiàn)顯著或極顯著升高。該結果提示在大腸桿菌刺激后可以明顯提高TLRs在小尾寒羊外周血白細胞和乳腺組織中的相對表達量,具有時間依賴性,研究表明小尾寒羊多種TLRs都參與了機體對病原體的識別,為進一步研究不同TLRs在炎癥發(fā)病過程中的作用機制提供了數據支持和基礎資料。
[Abstract]:Toll like receptor (TLRs) is a type I transmembrane protein that recognizes pathogen associated molecule patterns of PAMPs and contains an extracellular domain rich in leucine repeats. It activates the downstream inflammatory pathway. Inducing the immune system to secrete corresponding cytokines in order to remove or resist the corresponding pathogenic microbes. The occurrence of mastitis in small tail Han sheep has been an important reason that hinders the development of sheep industry. How to utilize the important role of TLR in innate immunity, The prevention and treatment of bacterial mastitis has become a new research hotspot. In order to study the expression of TLRs in peripheral blood leukocytes and breast tissues of small tail Han sheep after invasion of Escherichia coli into small tail Han sheep breast tissue, QRT-PCR was used to detect the relative expression of TLRs gene in the blood and mammary gland tissues after infection with E. coli for 12 h, 24 h, 36 h, 48 h and 72 h. The Western-blot method was used to study the relative expression of TLRs protein in breast tissue at different time after infection with E. coli. The results showed that after E. coli invaded the mammary gland of small tail Han sheep, the leucocyte in peripheral blood of small tail Han sheep was detected. The expression of TLR1m10 was found in all the small tail Han sheep with the exception of TLR8, and the expression of TLR2TLR1O10 mRNA in peripheral blood leukocytes of small tail Han sheep was significantly or extremely significantly increased after 24 hours of infection with Escherichia coli. After 36 hours of infection, there was a significant or extremely significant increase in TLR2O4, TLR2, TLR4 and TLR7 mRNA in breast tissue of small tail Han sheep. The results showed that the relative expression of TLR1, TLR2, TLR5, TLR6, TLR7, TLR10 and TLR7TLR10 in small tail Han sheep were all increased after infection, and the results showed that the relative expression of TLR5, TLR6, TLR7 and TLR10 in small tail Han sheep was higher than that in small tail Han sheep. Among them, TLR1O4A4 increased significantly at 12h and TLR2O4 increased significantly or extremely significantly at 24h. TLR1O2O2O2TLR2H4 increased significantly or extremely significantly at 48h. TLR247H10 increased significantly or very significantly at 72 h after treatment. Compared with the control group, the expression of TLRs protein was up-regulated with the prolongation of infection time. The results showed that the relative expression of TLRs in peripheral blood leukocytes and mammary gland of small tail Han sheep was significantly increased after stimulation of E. coli in a time dependent manner. The results showed that a variety of TLRs in small tail Han sheep were involved in the identification of pathogens, which provided data support and basic data for further study on the mechanism of different TLRs in the pathogenesis of inflammation.
【學位授予單位】：甘肅農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S858.26

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