本文選題：家兔　切入點(diǎn)：MC1R　出處：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：基因控制著毛色色素的形成和類型,從而能夠決定哺乳動物的毛色。不同種屬哺乳動物的毛色由不止一個(gè)基因決定;這些基因不僅能在突變后影響毛色的形成,而且能夠通過彼此間的相互作用控制毛色的產(chǎn)生。所以尋找控制家兔各毛色的主效基因?qū)τ诩彝妹募兓哂兄匾饬x,其中黑素皮質(zhì)素受體1(MC1R)基因、鼠灰色(AGOUTI)基因、酪氨酸酶(TYR)基因、酪氨酸酶相關(guān)蛋白1(TYRP1)基因及毛色位點(diǎn)稀釋(MLPH)基因是與家兔毛色有關(guān)的五個(gè)候選基因。本實(shí)驗(yàn)以青島康大兔業(yè)發(fā)展有限公司與山東農(nóng)業(yè)大學(xué)聯(lián)合培育的749只肉兔及蒙陰益達(dá)兔業(yè)有限公司與山東農(nóng)業(yè)大學(xué)聯(lián)合培育的399只長毛兔為實(shí)驗(yàn)材料,共計(jì)1148只。采樣時(shí)根據(jù)顏色將家兔分為黃色、黑色、麻色、白色、青紫藍(lán)及八點(diǎn)黑色。對各種顏色先進(jìn)行混池測序,利用DNAMAN軟件及chromas軟件尋找各顏色候選基因編碼區(qū)的SNPs位點(diǎn);再對發(fā)現(xiàn)的每種顏色的每個(gè)SNPs位點(diǎn)取20個(gè)樣本單獨(dú)擴(kuò)增測序,對SNP位點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證,統(tǒng)計(jì)基因型及基因型頻率,篩選控制該顏色的主效控制基因。MC1R基因:本研究在家兔MC1R基因的外顯子發(fā)現(xiàn)四個(gè)突變位點(diǎn)(1)317→346 ins30,(2)346G→A,(3)568T→C,(4)292-297del6,四個(gè)突變位點(diǎn)在不同毛色家兔中的存在情況不同:黃色家兔未發(fā)現(xiàn)突變,黑色、麻色、白色、青紫藍(lán)及八點(diǎn)黑色家兔中四個(gè)突變位點(diǎn)的存在復(fù)雜多樣,因此單個(gè)MC1R基因無法決定家兔是何種毛色。AGOUTI基因:本實(shí)驗(yàn)在AGOUTI基因的四個(gè)外顯子的研究發(fā)現(xiàn),在基因的第一、第三及第四外顯子各毛色家兔未發(fā)現(xiàn)SNPs位點(diǎn),在第二外顯子發(fā)現(xiàn)2個(gè)突變位點(diǎn)(5)294G→A,(6)315G→A兩個(gè)突變位點(diǎn),兩個(gè)位點(diǎn)發(fā)生連鎖且只存在黃色、麻色及青紫藍(lán)色的家兔中。黃色、麻色家兔的EEFF基因型為優(yōu)勢基因型,其頻率分別為0.95及0.85;青紫藍(lán)色家兔的EeFf基因型為優(yōu)勢基因型,其頻率為0.8。TYR基因:本實(shí)驗(yàn)對TYR基因的五個(gè)外顯子研究發(fā)現(xiàn)4個(gè)突變位點(diǎn),位點(diǎn)(7)210G→A,(8)176G→C,(9)197A→C及(10)240A→C,其中位點(diǎn)7位于第一外顯子,位點(diǎn)8及位點(diǎn)9位于第二外顯子,位點(diǎn)10位于第三外顯子。突變位點(diǎn)7及位點(diǎn)8,突變后其優(yōu)勢基因型頻率較低,直接作用于毛色的影響小,對實(shí)驗(yàn)研究意義不大;只有八點(diǎn)黑色家兔在位點(diǎn)9發(fā)生突變,II基因型為其優(yōu)勢基因型,且基因型頻率為1,因此突變位點(diǎn)9可以作為八點(diǎn)黑色家兔的篩選標(biāo)記。在突變位點(diǎn)10處,黃色家兔及八點(diǎn)黑色家兔的JJ基因型為優(yōu)勢基因型,其基因型頻率為1,黑色家兔及青紫藍(lán)色家兔的Jj基因型為優(yōu)勢基因型,其基因型頻率為1,麻色家兔及白色家兔jj基因型為優(yōu)勢基因型,其基因型頻率為1。TYRP1基因:本實(shí)驗(yàn)對TYRP1基因的七個(gè)外顯子研究發(fā)現(xiàn)3個(gè)突變位點(diǎn)(11)73C→T,(12)155Tdel,(13)158T→A,且突變位點(diǎn)12及13構(gòu)成連鎖,只發(fā)生在黃色家兔中,MMNN基因型為其優(yōu)勢基因型,且基因型頻率為1;在其他顏色家兔中未發(fā)現(xiàn)位點(diǎn)12及位點(diǎn)13的突變,因此推測此基因位點(diǎn)的突變與家兔黃色的產(chǎn)生有關(guān)。位點(diǎn)11突變后其優(yōu)勢基因型頻率較低,直接作用于毛色的影響小,對實(shí)驗(yàn)研究意義不大.MLPH基因:本實(shí)驗(yàn)對MLPH基因的第五外顯子研究發(fā)現(xiàn)兩個(gè)突變位點(diǎn)(14)206T→C及位點(diǎn)(15)208C→T。通過研究發(fā)現(xiàn),各顏色家兔在位點(diǎn)14及位點(diǎn)15處的突變種類復(fù)雜,因此無特征性的突變。由此得出,單獨(dú)的MLPH基因與家兔毛色的產(chǎn)生意義不大。本研究對影響毛色的五個(gè)候選基因的編碼區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增測序,分析了它們與毛色的關(guān)系。通過比較分析各顏色家兔SNP位點(diǎn)的信息,結(jié)合分子生物學(xué)的研究方法,本實(shí)驗(yàn)推測出了各顏色的主要控制基因及該顏色的基因型,黃色家兔的主要控制基因?yàn)門YRP1基因,基因型為MM;黑色家兔的主要控制基因?yàn)锳GOUTI基因與TYR基因,基因型為eeJj;麻色家兔的主要控制基因?yàn)锳GOUTI基因與TYR基因,基因型為EEjj;白色家兔的主要控制基因?yàn)锳GOUTI基因與TYR基因,基因型為eejj;青紫藍(lán)色主要控制基因?yàn)锳GOUTI基因與TYR基因,基因型為EeJj;八點(diǎn)黑色家兔的主要控制基因?yàn)門YR基因,基因型為II。均可被期望用來作為家兔毛色純化的分子標(biāo)記,但是其在生產(chǎn)實(shí)際中的應(yīng)用還有待進(jìn)一步擴(kuò)大群體來驗(yàn)證,且在分子表達(dá)等方面需進(jìn)一步研究論證。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S829.1

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