本文選題：轉基因玉米　切入點：品系VCO--　出處：《食品科學》2017年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：建立基于QX100微滴式數(shù)字聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)平臺的我國未批準轉基因玉米品系VCO-01981-5的二重微滴式數(shù)字PCR定量檢測方法。該方法選擇基因組中單拷貝的玉米內(nèi)源基因hmg和VCO-01981-5品系邊界序列為定量靶序列,分別設計不同的PCR擴增引物和TaqMan探針,并對兩種探針用不同的熒光進行標記,然后將上述探針和引物置于同一個PCR反應體系中以同時定量兩個靶標序列。特異性實驗結果顯示該法只有VCO-01981-5品系的兩個靶序列才都有擴增信號。靈敏度、線性和準確性實驗結果顯示在定量結果相對標準偏差不大于25%時,最低可穩(wěn)定定量5個拷貝的VCO-01981-5品系特異性序列分子和4個拷貝的內(nèi)源基因hmg分子;而在高達50 ng模板DNA以下范圍內(nèi),PCR反應模板量與測定樣品拷貝數(shù)之間呈高度正相關,相關系數(shù)達0.99以上;平均誤差小于10%。結果表明本研究建立的該玉米品系定量方法特異性強,穩(wěn)定性好,精確性、準確性以及靈敏度高,定量范圍廣,可用于進、出口農(nóng)產(chǎn)品和食品中該轉基因玉米品系成分的定量檢測。此外,該法還可為其他轉基因玉米品系及其他轉基因作物品系建立類似定量檢測方法提供參考。
[Abstract]:A double microdrop digital PCR quantitative detection method for transgenic maize strain VCO-01981-5 based on QX100 microdrop polymerase chain reactionation platform was established. The method was used to select the single copy maize endogenous gene in the genome. Because the boundary sequences of hmg and VCO-01981-5 strains are quantitative target sequences, Different PCR amplification primers and TaqMan probes were designed, and the two probes were labeled with different fluorescence. Then the probe and primer were placed in the same PCR reaction system to quantify the two target sequences simultaneously. The specificity experiment showed that only the two target sequences of the VCO-01981-5 strain had amplification signal. The results of linear and accuracy experiments showed that when the relative standard deviation of quantitative results was not greater than 25, the lowest stable quantification of 5 copies of VCO-01981-5 strain specific sequence molecules and 4 copies of endogenous gene hmg molecules; However, within the range of up to 50 ng template DNA, there was a highly positive correlation between the amount of template and the copy number of the sample, the correlation coefficient was more than 0.99, and the average error was less than 10%. The results showed that the quantitative method established in this study had strong specificity. Good stability, accuracy, accuracy and sensitivity, a wide range of quantification, can be used to import and export agricultural products and food components of the transgenic corn strain quantitative detection. The method can also be used as a reference for the establishment of similar quantitative detection methods for other transgenic maize lines and other transgenic crop lines.
【作者單位】： 安徽農(nóng)業(yè)大學茶與食品科技院茶樹生物學與資源利用國家重點實驗室;深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術中心;深圳市檢驗檢疫科學研究院;
【基金】：公益性行業(yè)(質(zhì)檢)科研專項(201410014-2) 深圳市基礎研究計劃項目(JC201105190969A) 國家質(zhì)檢總局科技司項目(2009IK257)
【分類號】：S513

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本文編號：1564945