本文選題：拮抗細菌　切入點：芽胞桿菌　出處：《北京農(nóng)學(xué)院》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：隨著人們對食品安全和改善生態(tài)環(huán)境要求的不斷提高,生物防治也越來越受到重視,并逐漸成為研究和應(yīng)用的熱點。本研究對實驗室分離得到的拮抗細菌進行了初步篩選鑒定和抑菌譜檢測,并PCR驗證了各拮抗細菌中的4種環(huán)脂肽合成相關(guān)基因,以對拮抗細菌的拮抗機理進行初步判定。本研究主要結(jié)果如下：1、從北極采回土壤樣品中共分離出12株細菌,平板對峙法對其進行了拮抗活性試驗的初步篩選,結(jié)果表明,只有X1-2對草莓褐色輪斑病菌(Sphaeronaemella fragariae) CMB-2具有一定的拮抗活性,其抑菌帶的寬度達17 mm,而其他11株細菌均未產(chǎn)生明顯的抑菌帶。2、對實驗室保存的8株拮抗細菌以及從北極土壤樣品中篩選得到的X1-2進行了16S rDNA、gyrA、gyrB基因的分子生物學(xué)鑒定,結(jié)果表明：在9株被鑒定的拮抗細菌中有5株解淀粉芽胞桿菌(Bacillus amyloliquefaciens),分別為BJ-6、BJ-7、BJ-8、22#口33#：2株枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis) BJ-9和X1-2；1株嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas maltophilid) 1#和1株蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis) BT。3、測定了9株拮抗細菌對植物病原菌的抑菌活性,結(jié)果表明：B. amyloliquefaciens BJ-6、BJ-7、BJ-8、22#、33#抑菌譜較廣,且抑菌活性強；S. maltophilia 1#次之；而B. subtilis BJ-9、X1-2和5. thuringiensis BT的抑菌譜較窄,抑菌活性相對較弱。4、對9株細菌進行了4種環(huán)脂肽合成基因(fenD、bacD、ituA、sfp)的PCR檢測,結(jié)果表明B.amyloliquefaciens 中BJ-6、BJ-8、22#、33#菌株中均含有4中所檢測的基因,而5. amyloliquefaciens BJ-7中未檢測到表面活性素基因；5. maltophilia 1#中未檢測到表面活性素基因sfp和豐原素基因fenD;而四種所檢測的基因均未擴增到的為B. subtilis BJ-9和X1-2和蘇云金芽胞桿菌BT。5、利用重疊PCR技術(shù)將豐原素合成基因fenD上下游連接在一起,連接在溫敏質(zhì)粒pKSV7上構(gòu)建fenD基因缺失載體；然后利用同源交換的方法對B. amyloliquefaciens BJ-6的豐原素合成相關(guān)基因進行缺失突變。由于電激轉(zhuǎn)化率低,以及基因重組率低的原因,結(jié)果并未篩選出突變菌株。
[Abstract]:With the increasing demands on food safety and improving ecological environment, biological control has been paid more and more attention. In this study, the antagonistic bacteria isolated in the laboratory were screened and identified, and the bacteriostasis spectrum was detected, and PCR confirmed four genes related to the synthesis of cyclopeptide in the antagonistic bacteria. The main results of this study are as follows: 1. 12 strains of bacteria were isolated from soil samples collected from the Arctic. Only X1-2 had a certain antagonistic activity against CMB-2 of Sphaeronaemella fragariaeae. The width of the inhibition band was 17 mm, but none of the other 11 strains produced obvious inhibition band. The molecular biological identification of 8 antagonistic bacteria preserved in laboratory and X1-2 gene selected from Arctic soil samples was carried out. The results showed that among the 9 identified antagonistic bacteria, 5 were Bacillus amyloliquefaciens1#, which were BJ-6, BJ-7, BJ-8, 2, #33: 2, Bacillus subtilisi, and X1-21, Stenotrophomonas maltophilid1# and Bacillus thuringiensis, respectively. The inhibitory activity of 9 antagonistic bacteria against plant pathogens was determined. The results showed that the bacteriostatic spectrum of amyloliquefaciens BJ-6, BJ-7, BJ-822, #an3 was broad, and the bacteriostatic activity was higher than that of S. maltophilia 1#, while that of BJ-9 X1-2 and 5. thuringiensis BT was narrower and weaker than that of thuringiensis BT. PCR was used to detect the four cyclopeptide synthesizer genes, fendacidin DituAfp, from 9 strains of bacteria, and the results showed that the inhibition spectrum of BJ-6 and BJ-7 BJ-8 was higher than that of thuringiensis BJ-7BJ-8, and the antibacterial activity was higher than that of S.#en1# 1#, while the inhibitory spectrum of BJ-9 X1-2 and 5. thuringiensis BT was relatively weak. The results showed that the BJ-6, BJ-8J22, #ing-33# strains of B.amyloliquefaciens contained 4 genes, However, no surface active gene was detected in amyloliquefaciens BJ-7. Sfp and fenDin genes were not detected in maltophilia 1#, while B.#en4# BJ-9 and X1-2 and Bacillus thuringiensis BT.5 were not amplified from the four detected genes. The gene fenD was linked together by overlapping PCR technique. The deletion vector of fenD gene was constructed by ligating into the thermo-sensitive plasmid pKSV7, and the deletion mutation of the gene related to the oncogene synthesis of B. amyloliquefaciens BJ-6 was carried out by using homology exchange method. Due to the low conversion rate of electric excitation and the low rate of gene recombination, The mutant strain was not screened out.
【學(xué)位授予單位】：北京農(nóng)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S476

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