發(fā)布時間：2018-03-02 09:13

  本文關鍵詞： NeuroD 基因克隆 生物信息學分析 pIRES-AcGFP-ND　出處：《生物技術通報》2017年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：克隆大鼠NeuroD2基因,旨在構建p IRES2-Ac GFP1-ND2真核表達載體并檢測其在小鼠MSCs中的表達。采用RTPCR技術克隆大鼠NeuroD2基因,分析該蛋白質(zhì)結構、功能域、細胞定位及與其他物種同源性;構建pIRES2-AcGFP1-ND2表達載體并轉染小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs);采用Real-time PCR、免疫熒光及Western blot技術檢測重組質(zhì)粒在小鼠MSCs中的表達。結果表明,大鼠NeuroD2基因CDS區(qū)全長1 149 bp,共編碼382個氨基酸,屬于b HLH家族,二級結構以α-螺旋和無規(guī)卷曲為主,空間結構呈現(xiàn)近似"螺旋-環(huán)-螺旋(HLH)"結構,主要分布在細胞核,氨基酸序列與家鼠(99%)、羅猴(98%)、人(97.7%)同源性較高;Real-time PCR結果表明轉染組NeuroD2基因表達量顯著高于對照組(P0.05);免疫熒光及Western blot結果顯示轉染組NeuroD2蛋白表達量顯著高于對照組(P0.05)。成功克隆大鼠NeuroD2基因并構建了pIRES2-AcGFP1-ND2真核表達載體。
[Abstract]:Rat NeuroD2 gene was cloned to construct the eukaryotic expression vector of p IRES2-Ac GFP1-ND2 and to detect its expression in mouse MSCs. The rat NeuroD2 gene was cloned by RTPCR technique. The protein structure, functional domain, cellular location and homology with other species were analyzed. PIRES2-AcGFP1-ND2 expression vector was constructed and transfected into mouse bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs). The expression of the recombinant plasmid in mouse MSCs was detected by Real-time PCR, immunofluorescence and Western blot. The results showed that the CDS region of rat NeuroD2 gene was 1 149 BP, encoding 382 amino acids. It belongs to b HLH family. The secondary structure is 偽 -helix and random crimp. The spatial structure is similar to "helix-ring-helix HLH" structure, mainly distributed in the nucleus. The results of real-time PCR showed that the expression of NeuroD2 gene in the transfected group was significantly higher than that in the control group, and the expression of NeuroD2 protein in the transfected group was significantly higher than that in the control group. The results of immunofluorescence and Western blot showed that the expression of NeuroD2 protein in the transfected group was significantly higher than that in the control group. Rat NeuroD2 gene was cloned successfully and the eukaryotic expression vector of pIRES2-AcGFP1-ND2 was constructed.
【作者單位】： 甘肅農(nóng)業(yè)大學生命科學技術學院;蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院骨科研究所;
【基金】：國家自然科學基金面上項目(81470087) 全軍十二五面上項目(CWS11C228)
【分類號】：Q78

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本文編號：1555897