本文關鍵詞： 喉鱗狀細胞癌 miR-129-2基因 甲基化　出處：《鄭州大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：喉癌是頭頸部最常見的腫瘤,喉癌的發(fā)生發(fā)展目前尚無明確病因,可能是由下列多種因素共同作用導致,主要有吸煙、飲酒、病毒感染、性激素、職業(yè)暴露等有關。喉鱗狀細胞癌的發(fā)生是個多因素互相作用并共同參與、長期的、復雜的連續(xù)過程。盡管人們對喉癌的影響因素和分子機制有了一定的了解,喉癌治療的五年生存率仍低于50%,喉癌的最常見病理分型為鱗狀細胞癌,喉癌的早期診斷及喉癌復發(fā)的早期判斷對喉鱗癌的治療及預后至關重要,而目前人們對于相關的分子機理及分子標志的認識還很有限�；蚣谆潜碛^遺傳學中的一種,在哺乳動物細胞中,幾乎所有的DNA甲基化都發(fā)生在CpG島胞嘧啶,研究證實,啟動子區(qū)CpG島異常甲基化是最多見的生物學標志之一,可能對癌癥治療包括早期癌癥檢測,表觀遺傳學腫瘤分類,預測腫瘤預后,治療干預等有很大幫助。研究發(fā)現(xiàn),miRNAs與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有密切的關系。喉癌組織中有多種miRNAs異常表達。MicroRNAs是一系列小的非編碼RNAs,通過調節(jié)目標基因的表達而引起mRNA的表達下降或抑制mRNA轉錄。miR-129-2是微小RNA中的一員,其基因位于染色體11p11.2。己有研究報道,miR-129-2的異常表達與子宮內膜癌、膀胱癌、胃癌等許多人類腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有關。但是miR-129-2與LSCC關系的研究卻較為少見.為了深入理解喉鱗狀細胞癌發(fā)生及發(fā)展的分子生物學機理,尋找鑒定相應的分子生物學指標志,為進一步治療喉癌奠定基礎。本文將對miR-129-2與喉鱗癌的關系作進一步的研究。目的1.研究miR-129-2基因啟動子在喉癌組織和匹配癌旁組織,以及喉癌細胞系的甲基化狀態(tài)。2.研究miR-129-2在喉癌組織的表達水平及miR-129-2甲基化與其表達水平的關系。3.miR-129-2過表達對喉癌細胞增殖的影響。方法采用甲基化敏感性特異性聚合酶鏈反應(msre-qpcr)的方法測定喉癌細胞系hep-2細胞和29對喉癌組織和癌旁組織中mir-129-2基因的甲基化水平。每一標本的hm(甲基化強度)≥10%定義為發(fā)生甲基化。0%hm10%定義為非甲基化。采用熒光定量pcr方法測定喉癌患者癌組織及匹配的癌旁組織中mir-129-2基因的mrna表達水平,以β-actin作為內參基因。通過測定樣本中目的基因mir-129-2模板的ct值來反應模板的含量。對每一個樣本,用Δct(ctmir129-2-ctβ-actin)值表示目的基因與內參基因間的ct差值。應用去甲基化藥物分析甲基化對喉癌細胞中mir-129-2基因表達的影響。最后利用mtt實驗在喉癌細胞系中驗證mir-129-2對腫瘤相關特性的影響。結果1.熒光定量pcr檢測甲基化結果結果顯示,mir-129-2啟動子區(qū)在喉癌細胞系hep-2細胞中發(fā)生了甲基化。在喉癌組織中mir-129-2甲基化頻率為58.62%(17/29),在癌旁組織未發(fā)生mir-129-2甲基化.2.mir-129-2在喉癌組織及癌旁組織的表達水平喉癌組織中mir-129-2表達水平低于癌旁組織(p0.05).3.喉癌細胞系去甲基化處理結果hep-2細胞系在去甲基化和去乙酰化藥物處理后與空白對照相比,mir-129-2的表達明顯增高。4.mtt實驗結果hep-2細胞中過表達mir-129-2基因后,與轉入空載質粒對比,細胞的生長明顯受到抑制。結論1.mir-129-2在喉癌組織和喉癌細胞系有明顯的甲基化。2.mir-129-2在喉癌組織表達降低。3.mir-129-2的表達降低與基因啟動子甲基化有關。4.miR-129-2基因過表達可抑制細胞增殖,說明miR129-2在喉癌中起抑癌基因的作用。
[Abstract]:The expression of miR - 129 - 2 in laryngeal squamous cell carcinoma is closely related to the occurrence and development of laryngeal squamous cell carcinoma .

【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R739.65
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本文編號：1541868