本文關(guān)鍵詞： 家蠶 Hippo通路 BmYki 表達(dá) 功能　出處：《西南大學(xué)》2016年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：Hippo通路是近年發(fā)現(xiàn)的一條通過(guò)調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖及凋亡等過(guò)程從而控制器官大小的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,該通路在果蠅及哺乳動(dòng)物中非常保守。轉(zhuǎn)錄共激活因子Yorkie(Yki)是Hippo通路下游的核心成員,Hippo通路主要經(jīng)由Yki調(diào)控下游靶基因進(jìn)并實(shí)現(xiàn)控制器官大小的功能。家蠶是著名的經(jīng)濟(jì)昆蟲(chóng)和鱗翅目模式昆蟲(chóng)。研究家蠶器官大小調(diào)控相關(guān)信號(hào)通路及其關(guān)鍵基因,對(duì)于揭示鱗翅目昆蟲(chóng)的共有生物性狀以及利用基因靶標(biāo)改造家蠶的生產(chǎn)性能,具有重要理論價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義。本研究以家蠶Hippo通路下游的轉(zhuǎn)錄共激活因子BmYki為靶標(biāo),對(duì)其進(jìn)行克隆以及基因結(jié)構(gòu)、亞細(xì)胞定位、時(shí)空表達(dá)特征等分析,并重點(diǎn)在細(xì)胞水平上探究其生物學(xué)功能。取得的主要結(jié)果如下:1、BmYki基因的克隆及序列特征分析自家蠶中鑒定并克隆了BmYki基因的CDS序列,其中從二化性大造品系中克隆了3種剪接形式BmYki-S1、BmYki-S2和Bm Yki-S3,從多化性黃血品系中克隆了4種剪接形式BmYki-S1、BmYki-S2、BmYki-S3和BmYki-S4。這是迄今為止首次發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄共激活因子Yki存在多種選擇性剪接形式。2、BmYki基因的亞細(xì)胞定位分析選取BmYki-S1和BmYki-S2兩種剪接形式,構(gòu)建了BmYki-S1和BmYki-S2分別與EGFP融合的亞細(xì)胞定位表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染家蠶卵巢細(xì)胞株BmNs并進(jìn)行DAPI染色和熒光觀察,結(jié)果表明BmYki-S1和BmYki-S2均定位在BmNs的細(xì)胞質(zhì)中,這與果蠅及哺乳動(dòng)物Yki基因的定位結(jié)果類(lèi)似。3、BmYki基因的組織和發(fā)育時(shí)期轉(zhuǎn)錄表達(dá)分析利用熒光定量PCR技術(shù),對(duì)BmYki基因在五齡第3天家蠶各主要組織以及一齡1天至化蛾1天等發(fā)育時(shí)期的表達(dá)特征進(jìn)行了分析。結(jié)果表明,Bm Yki基因在檢測(cè)的各組織和發(fā)育時(shí)期的表達(dá)水平較低,其中在后部絲腺和中部絲腺的表達(dá)水平相對(duì)最高,在精巢、卵巢、氣管、頭部的表達(dá)水平相對(duì)較高,在脂肪體、血液、馬氏管、前部絲腺中的表達(dá)水平相對(duì)最低。BmYki基因在五齡3天和化蛾1天各有一個(gè)表達(dá)峰值,其中五齡3天的峰值最高,其他各發(fā)育時(shí)期的表達(dá)水平較低。BmYki基因在絲腺以及絲蛋白開(kāi)始大量合成的五齡第3天表達(dá)最為活躍,暗示其可能參與了絲腺或絲蛋白合成調(diào)控。4、BmYki基因的細(xì)胞超表達(dá)分析利用GAL4/UAS雙元表達(dá)系統(tǒng),在家蠶胚胎細(xì)胞株BmE中過(guò)表達(dá)BmYki基因,然后對(duì)11個(gè)已知的Hippo通路下游靶基因以及11個(gè)絲蛋白合成相關(guān)基因的表達(dá)情況進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè),結(jié)果顯示:下游靶基因Myc、Ras、E2F1、Diap1、Caspase1、Kibra和Ex均有顯著上調(diào)表達(dá);Diap2、Caspase9略有上調(diào)表達(dá);Wg略有下調(diào)表達(dá);CycE和基因無(wú)明顯變化;絲蛋白合成相關(guān)基因FibH、P25、Seri1、Seri2、Seri3、SGF1、SGF2和SGF3出現(xiàn)明顯下調(diào)表達(dá);FibL、Sage和Dimm無(wú)明顯變化。上述結(jié)果表明,家蠶BmYki(Hippo通路)具有調(diào)控細(xì)胞增殖及凋亡等生物學(xué)過(guò)程的功能,并參與了絲蛋白合成相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控。5、BmYki基因的細(xì)胞敲除分析利用CRISPR/Cas9系統(tǒng),在家蠶胚胎細(xì)胞株BmE中進(jìn)行了BmYki基因敲除,然后對(duì)11個(gè)已知的Hippo通路下游靶基因以及11個(gè)絲蛋白合成相關(guān)基因的表達(dá)情況進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè),結(jié)果顯示:敲除BmYki基因后,下游靶基因Myc、Ras、Diap1、Caspase9、Caspase1、Kibra和Wg均出現(xiàn)下調(diào)表達(dá),這一變化趨勢(shì)與超表達(dá)BmYki相反;而絲蛋白合成相關(guān)基因的變化趨勢(shì)與超表達(dá)BmYki基本一致,其中FibH、P25、Ser1、Ser2、Ser3、SGF1、SGF2和SGF3出現(xiàn)下調(diào)表達(dá)。
[Abstract]:In this paper , we have studied the gene structure , the gene structure , the gene structure , the subcell localization , the space - time expression characteristic of the gene target gene . The results show that the expression level of the Bm Yki gene is lower than that of the Yki gene . The results showed that the downstream target gene Myc , Ras , Diap1 , Caspase9 , Caspase1 , Kibra and SGF3 were downregulated . The results showed that the change trend of the downstream target gene Myc , Ras , Diap1 , Caspase9 , Caspase1 , SGF2 and SGF3 was downregulated .

【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：Q78

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 史夢(mèng)婕;邵松軍;李潔媚;周艷芳;黃培春;;Hippo通路與腫瘤相關(guān)性研究進(jìn)展[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2014年03期

2 鮑乾坤;何金龍;朱毅;;Hippo-YAP通路在心血管系統(tǒng)中的作用[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2014年03期

3 Xudong Huang;Lai Shi;Jun Cao;Fangfei He;Renling Li;Yan Zhang;Shuang Miao;Longjin Jin;Jia Qu;Zhouhua Li;Xinhua Lin;;The Sterile 20-Like Kinase Tao Controls Tissue Homeostasis by Regulating the Hippo Pathway in Drosophila Adult Midgut[J];Journal of Genetics and Genomics;2014年08期

4 丁鑫;孟剛;童曉玲;代方銀;魯成;;WW結(jié)構(gòu)域與Hippo信號(hào)通路[J];蠶業(yè)科學(xué);2013年06期

5 許飛;張進(jìn);馬端;;Hippo/YAP和Wnt/β-catenin通路的對(duì)話[J];遺傳;2014年02期

6 盧洪飛;萬(wàn)福生;;Hippo-YAP信號(hào)通路在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用[J];生命的化學(xué);2014年04期

7 門(mén)通;樸善花;滕春波;;Hippo信號(hào)通路轉(zhuǎn)錄效應(yīng)因子TAZ/YAP對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞分化的調(diào)控[J];遺傳;2013年11期

8 ;[J];;年期

相關(guān)會(huì)議論文 前3條

1 Zhan Yang;;MicroRNA-155 and Hippo/STK3 Form a Feedback Loop to Participate in Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation[A];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第十一次會(huì)員代表大會(huì)暨2014年全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集——專(zhuān)題報(bào)告五[C];2014年

2 Hongtan Wu;Luyao Wei;Suyuan Ji;Fuqin Fan;Funiu Qin;Lanfen Chen;Dawang Zhou;;MST1/2-Yap signaling pathway in organ size control and cancer development[A];生命的分子機(jī)器及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)——2012年全國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)摘要集[C];2012年

3 Zhan Yang;Bin Zheng;Yu Zhang;Xin-hua Zhang;Ming He;Dong Ma;Jin-kun Wen;;MicroRNA-155 and Hippo/STK3 Form a Feedback Loop to Participate in Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation[A];第十二屆全國(guó)脂質(zhì)與脂蛋白學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2014年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 記者 胡德榮;我學(xué)者發(fā)現(xiàn)原癌蛋白質(zhì)YAP抑制劑[N];健康報(bào);2014年

2 記者 徐瑞哲;人造“克星”抑制胃癌[N];解放日?qǐng)?bào);2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 安健;Nedd4-like E3泛素連接酶調(diào)控Angiomotin/p130蛋白穩(wěn)定性的分子機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

2 劉歡;Hippo通路效應(yīng)蛋白YAP調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的機(jī)制與功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

3 劉鵬;HBV preS2 通過(guò)miR-338-3p 調(diào)控Hippo通路效應(yīng)分子TAZ促進(jìn)肝細(xì)胞肝癌作用研究[D];山東大學(xué);2015年

4 朱國(guó)華;上調(diào)miR-130b通過(guò)滅活Hippo信號(hào)通路來(lái)增強(qiáng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的表型[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2015年

5 韓笑;Hippo信號(hào)通路中TEAD蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能研究[D];吉林大學(xué);2016年

6 郭鵬達(dá);RARγ的缺失通過(guò)調(diào)控Hippo-Yap信號(hào)通路促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移[D];蘇州大學(xué);2016年

7 周菁;YAP在哮喘發(fā)生過(guò)程中的表達(dá)情況及其功能探討[D];南昌大學(xué);2016年

8 鄧軍;CUL4A通過(guò)調(diào)控Hippo通路促胃癌細(xì)胞增殖和侵襲的分子機(jī)制[D];南昌大學(xué);2016年

9 李佳;Hippo信號(hào)通路在調(diào)節(jié)卵巢生殖干細(xì)胞功能和延緩卵巢衰老中的作用[D];南昌大學(xué);2016年

10 劉乃華;磷酸二酯酶5/PKG通過(guò)Hippo/TAZ信號(hào)調(diào)控前列腺癌腫瘤干細(xì)胞干性及其分子機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陸亞紅;家蠶BmYki不同剪接體的功能研究[D];蘇州大學(xué);2016年

2 宋春暖;家蠶Hippo通路成員的全基因組鑒定與分析[D];西南大學(xué);2016年

3 王日遠(yuǎn);家蠶Hippo通路主基因BmYki的克隆、表達(dá)及功能初探[D];西南大學(xué);2016年

4 王曉霞;E-cadherin介導(dǎo)的麥冬皂苷B調(diào)控非小細(xì)胞肺癌Hippo通路的機(jī)制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

5 梁坤;Hippo信號(hào)通路在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床意義[D];青島大學(xué);2014年

6 魏文超;Hippo信號(hào)通路在胃粘膜癌變過(guò)程中的作用[D];青島大學(xué);2013年

7 向晟;Hippo通路主要組分與小鼠原始卵泡池大小的時(shí)序相關(guān)性研究[D];南昌大學(xué);2014年

8 錢(qián)瑩;家蠶Hippo信號(hào)通路主要基因的研究[D];蘇州大學(xué);2014年

9 沈龍霞;HCMV經(jīng)Hippo-YAP信號(hào)通路對(duì)絨毛外細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞功能影響的體外研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2014年

10 陳柯宏;LATS1基因去甲基化對(duì)人腎癌細(xì)胞生物學(xué)功能及其Hippo-YAP信號(hào)通路的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：1521282